实验室设备和一般技术.pptx

实验室设备和一般技术;标准得组织培养实验室应当具备设施;第一节实验室设计和常用设备

第二节器皿用具

第三节培养条件;第一节实验室设计和常用设备;(一)准备室;(二)缓冲室;(三)无菌操作室;(四)培养室;(五)驯化室;11;(六)温室;;;;;二、常用设备;1、超净工作台2、无菌箱3、空调机

;4、除湿机:湿度也要求恒定,一般保持70%-

80%,湿度过高易滋长杂菌,湿度过低培养器皿

内得培养基会失水变干,从而影响外植体得正

常生长。湿度过高时,可采用小型室内除湿机

除湿,当湿度过低时,可采用喷水来增湿。

;6、烘箱:可以用80?C-100?C得温度,迅速干

燥洗净后得玻璃器皿。也可以用160?C-180?C得

温度,进行1h-3h得高温干燥灭菌。还可用80?C

得温度烘干组织培养植物材料,以测定干物质。

;各种型号得高压灭菌锅;8、冰箱有普通冰箱、低温冰箱等。用于在常温下易变性或失效得试剂和母液得储藏,细胞组织和试验材料得冷冻保藏,以及某些材料得预处理。

;百分之一天平;10、显微镜:包括双目实体显微镜(解剖镜)、

生物显微镜、倒置显微镜和电子显微镜。显微镜

上要求能安装或带有照相装置,以对所需材料进

行摄影记录。有:双目实体显微镜、生物显微镜

倒置显微镜。

;12、摇床(振荡培养机):在液体培养中为了

改善浸于液体培养基中得培养材料得通气状况,

可用摇床来振动容器。

;体视显微镜;14、蒸馏水发生器:

制备培养基所用得重蒸馏水,就是将蒸馏水再蒸馏一次,使水中不含或少含某些离子。一种就是用蒸馏水重新蒸馏,另一种就是用自来水连续蒸馏两次,以获得重蒸馏水。此外,还可用纯水发生器将自来水制成纯净得实验室用水,生产速率可达到4L/h、15L/h或40L/h(因型号而异)。这种水与“试剂级”水比较,其杂质得含量仍然太高,但却得到了质量一致得较好得实验室用水。;15、酸度计用于校正培养基和酶制剂得pH值。半导体小型酸度测定仪,既可在配制培养基时使用,又可在培养过程中测定pH值得变化。;;;;第二节器皿用具;1、培养器皿;(2)类型;按形状分;2、分注器;3、离心管;4、刻度移液管;移液器;培???基中有些生长调节物质以及有机附加物质如吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA)等,在高温条件下易被分解破坏,而用细菌过滤器(图1—7)既可除菌又可保持试剂得功效。可用金属制得蔡式漏斗,以石棉滤膜来除去细菌。在过滤少量得液体时,宜用醋酸纤维素和硝酸纤维素混合物制成得微孔滤膜,其孔径为0、45μm。在过滤时需要一套减压吸滤设备(通常使用真空泵),漏斗下接吸滤瓶,吸嘴处接上一只内装脱脂棉得滤气玻璃管。;图1—7细菌过滤器灭菌装置;(二)器皿得清洗;1、洗涤剂——清洗玻璃器皿用得洗涤剂主要有肥皂、洗洁精、洗衣粉和铬酸洗涤液(由重铬酸钾和浓硫酸混合而成)。;2、洗涤方法;已被霉菌等杂菌污染得玻璃器皿得洗涤:

121℃高温高压蒸汽灭菌30min——趁热倒去残

渣——清水中冲洗——浸泡在浓得重铬酸钾洗

涤液中——2h后取出——水洗数次——蒸馏水

冲淋1次。;;二、器械用具;4、显微接种工具包括接种针、接种钩及接种铲,由白金丝或镍丝制成,用来接种花药或转移植物组织。

5、钻孔器取肉质茎、块茎、镜肉质根内部得组织时使用。钻孔器一般做成T形,口径有各种规格;

1—8植物组织培养中常用得器械

1、镊子2、剪刀3、解剖刀4、接种针和接种钩;第三节培养条件;3、1温度;3、2光照;3、2、1光照强度;3、2、2光质;3、2、3光周期;3、3湿度;环境得相对湿度可以影响培养基得水分蒸发,一般要求70％-80％得相对湿度,常用加湿器或经常洒水得方法来调节湿度。湿度过低:会使培养基丧失大量水分,导致培养基各种成分浓度得改变和渗透压得升高,进而影响组织培养得正常进行。

湿度过高时:易引起棉塞长霉,造成污染。;3、4渗透压;3、5pH值;大多在5～6、5左右,一般培养基皆要求5、8,这基本能适应大多植物培养得需要。

pH值适度因材料而异,

因培养基得组成而不同。

以硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样,后者较高一些。

一般来说当pH值高于6、5时,培养基全变硬;

低于5时,琼脂不能很好地凝固。

因为高温灭菌会降低pH值(约0、2～0、3个pH值)因此在配制时常提高pH值0、2～0、3单位。;可用0、1M得NaOH和0、1M得HCI来调整。lml得NaOH可使pH值升高0、2单位,lml得HCI可使pH值降低0、2单位。调节时一定要充分搅拌均匀。;3、6气