Gentier48E型实时荧光定量PCR仪标准操作规程SOP.pptxVIP

Gentier48E型实时荧光定量PCR仪标准操作规程(SOP)欢迎使用Gentier48E实时荧光定量PCR仪！本操作规程将帮助您提高实验效率和准确性。通过严格遵循本规程，您将能够获得可靠的实验结果并延长仪器使用寿命。ВМ作者：ВладимирМакаревич

目录仪器介绍了解仪器概述、组件构成、面板和软件界面实验操作掌握准备工作、操作步骤和数据分析维护与故障排除学习仪器维护保养、常见问题解决方法安全与质量控制确保实验安全性和结果可靠性

仪器概述仪器简介Gentier48E是一款高性能实时荧光定量PCR仪，采用先进的光学检测系统和精确的温控技术。应用领域广泛应用于基因表达分析、病原体检测、SNP分型等分子生物学研究领域。主要特点具有高灵敏度、高准确性、操作简便等特点，满足科研和临床需求。

仪器组件主机系统整合控制系统，负责仪器各部分协调工作。确保实验流程顺利进行。触摸屏直观的人机交互界面，方便用户操作和监控实验进程。具有高灵敏度。加热模块提供精确温控，实现PCR反应中所需的各种温度阶段。温度均一性高。荧光检测系统采用高灵敏度光电倍增管，确保荧光信号的准确捕获和分析。

仪器面板介绍电源开关位于机器右侧，用于启动和关闭仪器。按下后指示灯亮起。USB接口位于前面板，用于连接U盘导出数据。支持多种文件格式。网线接口位于后面板，用于连接局域网。可实现远程监控和数据传输。触摸屏位于前面板中央，是操作仪器的主要界面。显示清晰，反应灵敏。

软件界面介绍主界面提供实验创建、系统设置等功能实验设置界面设定PCR程序、样本信息和检测参数数据分析界面查看扩增曲线、溶解曲线等实验结果软件采用直观的图形界面设计，即使是初学者也能快速上手操作。菜单布局合理，功能分区明确。

准备工作：实验前准备试剂准备配制引物、探针和PCR试剂样本准备核酸提取、纯化和定量耗材准备PCR管、封板膜等实验耗材记录准备实验计划和记录表格充分的准备工作是实验成功的基础。确保所有试剂和耗材质量合格且在有效期内。

准备工作：实验环境准备1清洁实验台面使用75%酒精彻底擦拭实验台面。紫外灯照射30分钟进行消毒。2仪器状态检查开机自检，确认各功能模块正常。检查电源和网络连接是否稳定。3参数记录记录实验室温度、湿度等环境参数。确保环境条件符合实验要求。4物品准备准备实验所需的移液器、枪头等工具。确保数量充足且无污染。

准备工作：软件设置创建新实验在主界面点击新建实验按钮。输入实验名称、实验者信息和项目描述。选择检测方式根据实验需求选择相应的检测模式。可选择绝对定量、相对定量或熔解曲线分析。设置荧光通道根据荧光染料选择相应通道。常用FAM、HEX、ROX、Cy5等通道。设定实验参数设置样本数量、参照基因、阈值设定方式等。保存设置备用。

实验操作步骤：程序设置预变性设置设置95℃预变性10分钟，激活DNA聚合酶。2变性阶段设置95℃变性15秒，使双链DNA解旋为单链。退火阶段设置55-60℃退火30秒，促进引物与模板结合。延伸阶段设置72℃延伸30秒，合成新的DNA链。循环设置设置40个循环，重复变性-退火-延伸三个步骤。

实验操作步骤：加样1PCR反应液配制按照试剂盒说明书配制主反应液。每孔包含引物、探针、酶和缓冲液。2分装反应液将主反应液分装到PCR板孔中。通常每孔18μL反应液。3加入样本加入2μL样本DNA。确保充分混匀，避免气泡产生。4设置对照每次实验设置阴性对照和阳性对照。确保实验结果可靠。

实验操作步骤：封板准备封板膜取出适合的光学级封板膜。确保封板膜干净无污染。贴合封板膜轻轻将封板膜覆盖在PCR板上。从中间向四周平滑贴合。确保密封性使用封板工具沿孔周围压实。确保每个孔都完全密封。检查封板质量检查是否有起泡或未密封区域。必要时重新密封。

实验操作步骤：上机运行打开仪器舱门按下舱门释放按钮，等待舱门自动打开放入PCR板将密封好的PCR板放入样品槽，确保位置正确关闭舱门轻轻按下舱门，确保完全关闭启动程序点击软件界面上的开始运行按钮程序启动后，可以实时监控实验进程。系统会显示剩余时间和当前温度状态。

数据分析：扩增曲线扩增曲线查看在分析界面选择扩增曲线选项卡。观察曲线形态，正常曲线应呈S形。基线期、指数期和平台期应清晰可辨。异常曲线可能表明实验问题。阈值设定自动或手动设置合适的阈值。阈值应位于所有样本指数期的中点区域。阈值过高或过低都会影响Ct值的准确性。根据经验调整最优阈值。Ct值分析记录每个样本的Ct值。Ct值越小，表示起始模板量越多。比较样本间Ct值差异，计算相对表达量。注意分析阴性和阳性对照。

数据分析：标准曲线浓度(ng/μL)Ct值标准曲线通过已知浓度样本的Ct值绘制。斜率应在-3.1至-3.6之间，R2应大于0.98。曲线效率应在90%-110%范围内。利用