〖生物〗基因工程的基本操作程序课件-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

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本节聚焦;

1997年，我国政府首次批准商业化

种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。;

从社会中来

Bt抗虫蛋白

转移?

取出?

Bt基因;

普通棉花

(无抗虫特性)

将目的基因导入受体细胞

棉花细胞

目的基因的检测与鉴定

抗虫棉

(有抗虫特性);

第一步：目的基因的筛选与获取◆筛选合适的目的基因

目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表

达产物等的基因。

主要是编码特定蛋白质的基因，也可以是具有调控作用的因子。

如：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关基因。;

●从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选目的基因

√明确Bt基因的序列信息，对Bt抗虫蛋白有深入了解

√利用序列数据库(如GenBank)、序列对比工具(如BLAST)等，找到合适的目的基因;

第一步：目的基因的筛选与获取◆筛选合适的目的基因

●获取目的基因的方法

①人工合成目的基因基因比较小、核苷酸序列已知的序列，通过DNA合成仪用化学方法直接合成。

②通过构建基因文库来获取目的基因;

Slidingclamp

PCNA

Polδ

SSBs

Topoisomerase

5

3

Polε

Primase

RNAprimer

y

Okazaki

fragments

Pola

3

5

LaggingstrandLigase;

引物是一小段能

与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸;

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因

dATP与ATP在结构上有什么区别?dATP为什么能用作DNA复制的底物?;

A.变性

5T3

31IIlILIll5

温度上升到90℃以上，双链DNA解聚为单链。;

过程

3

5

3

5

3°

5

3

5;

TECHNIQUE

Power

source

CathodeAnode+

sizes

Gel;

第1组：引物I和Ⅱ会因局部发生碱基互补配对而失效

第2组：引物I自身折叠后会因出现局部碱基互补配对而失效

■要保证目的基因能与载体相连接，还要对引物进行什么操作?

要在两种引物的5端分别添加上限制酶的识别序列。

■如果循环n次，则共需消耗多少对引物?共需消耗2n-1对引物。;

第一步：目的基因的筛选与获取◆利用PCR获取和扩增目的基因

■利用PCR技术扩增目的基因，在第几轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段?比例是多少?;

复制次数;;

第二步：基因表达载体的构建

■获得了足量的Bt基因后，是否能直接将Bt基因导入棉花细胞呢?

不能。游离的DNA进入受体细胞，一般会直接被分解。

即使可以转录翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。;

如：光诱导、热诱导、创伤诱导、真菌诱导、共生细菌诱导表达基因启动子等。

终止子：一段有特殊序列的DNA片段。位于基因的下游，相当于一盏红色信号

灯，使转录在所需要的地方停下来。;

foreignDNAplasmid

/acZgene

AMP

stickyends

AMP

TcC

GGATC

cCTATGAGG

GC

SGATcCC

CTAGG.

AMP

transformation;

■构建基因表达载体时目的基因插入的位置应该在哪里?为什么?

应该插入启动子下游和终止子上游。因

为只有插入在启动子和终止子之间，目的基因才可以正常表达。

■构建基因表达载体时，能否用SmaI限制酶切割质粒?为什么?

不能，因为SmaI并不位于启动子终止子

之间，基因无法表达，并且切割会破坏

质粒的抗生素抗性基因，影响进一步的

筛选。;

第二步：基因表达载体的构建

■基于质粒和外源DNA的情况，可以如何选择限制酶进行酶切?

只使用EcoRI处理质粒和外源DNA,或者同时使用BamHI和HindIⅢ两种限制酶。

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