吉兰-巴雷综合征患者外周血记忆性T 细胞和记忆性B 细胞亚群.docx

吉兰-巴雷综合征患者外周血记忆性T细胞和记忆性B细胞亚群的变化及其临床意义

刘坛，黄小雨，张勇

1.湖州市第一人民医院神经内科，浙江湖州313000；2.徐州医科大学附属医院神经内科，江苏徐州221000

吉兰-巴雷综合征（Guillain-Barrésyndrome，GBS）是一类免疫介导的急性炎性周围神经病，主要病理生理机制是外周神经中抗体-抗原相互作用引起的补体介导的神经损伤[1-2]。既往研究发现体液免疫及细胞免疫共同参与此病的发生，然而国内外关于GBS免疫细胞亚群的研究尚不充分，尤其是记忆性细胞亚群在GBS患者外周血中的占比仍需进一步探讨。已有文献报道记忆性B细胞参与了GBS的发病[3]；也有学者指出记忆性T细胞可帮助记忆性B细胞更快速地产生抗体反应[4]。由此推测记忆性T细胞及记忆性B细胞均可能参与GBS的发病。本研究通过分析GBS患者记忆性T细胞及记忆性B细胞亚群的改变，为探索GBS的发病机制提供新思路。

所有研究对象均于入组后空腹抽取6ml静脉血，其中2ml静脉血用乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid，EDTA）抗凝，余静脉血不抗凝直接分离血清。采用人淋巴细胞分离液（天津灏洋生物公司）分离得到外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC），经磷酸缓冲盐溶液（phosphatebuffersaline，PBS）洗涤离心后加入鼠抗人CD3-APC-Cy7抗体、鼠抗人CD4-APC抗体、鼠抗人CD8-Percp-Cy5-5抗体、鼠抗人CD45RAV450抗体、鼠抗人CCR7-BV510抗体（美国BD公司）；同时设同型对照管，室温避光孵育15min后，流式细胞仪检测记忆性T细胞亚群，其中CD4+初始T细胞（naiveTcells，TN）表型为CD3+、CD4+、CD8-CD45RA+、CCR7+，CD4+中央记忆性T细胞（centralmemoryTcells，TCM）表型为CD3+、CD4+、CD8-CD45RA-、CCR7+，CD4+效应记忆性T细胞（effectormemoryTcells，TEM）表型为CD3+、CD4+、CD8-CD45RA-、CCR7-，CD4+终末分化效应记忆性T细胞（terminallydifferentiatedeffectormemoryTcells，TEMRA）表型为CD3+、CD4+、CD8-CD45RA-、CCR7-；CD8+TN细胞表型为CD3+、CD4-、CD8+CD45RA+、CCR7+，CD8+TCM细胞表型为CD3+、CD4-、CD8+CD45RA-、CCR7+，CD8+TEM细胞表型为CD3+、CD4-、CD8+CD45RA-、CCR7-，CD8+TEMRA细胞表型为CD3+、CD4-、CD8+CD45RA-、CCR7-。在分离的PBMC中加入鼠抗人CD45-Percp-Cy5-5抗体、鼠抗人CD19-APC、鼠抗人CD27-BV510、鼠抗人CD38-FITC抗体（美国BD公司），同时设同型对照管。室温避光孵育15min后，流式细胞仪检测记忆B细胞亚群，其中记忆B细胞表型为CD19+CD27+，浆母细胞表型为CD19+CD27+CD38+。

采用SPSS19.0统计学软件对数据进行处理分析。符合正态分布的计量资料用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验。不符合正态分布的计量资料以中位数（四分位数间距）[M（Q1，Q3）]表示，组间比较采用秩检验。计数资料以例数（百分率）[n（%）]表示，组间比较采用X2检验。采用Pearson相关性分析CD4+TEM及CD8+TEM占比与Hughes残疾评分、脑脊液蛋白、脑脊液免疫球蛋白G（immunoglobulinG，IgG）及记忆性B细胞的相关性。P0.05为差异有统计学意义。

GBS患者的一般资料分析见表1。与对照组相比，研究组患者的CD4+TN及CD8+TN均明显下降（P0.05），CD4+TEM及CD8+TEM均明显升高（P0.05），TCM及TEMRA在CD4和CD8上的比例差异无统计学意义（P0.05），见表2。

表1GBS患者的一般资料

表2两组患者的外周血记忆性T细胞亚群占比比较（n=16）

与对照组比较，研究组患者的记忆性B细胞比例明显升高（P0.05），浆母细胞的比例差异无统计学意义，见表3。

表3两组患者的外周血记忆性B细胞占比比较（n=16）

GBS患者外周血CD4+TEM及CD8+TEM占比与Hughes残疾评分、脑脊液蛋白、脑脊