DB51T 2466-2018 鲇拟态弧菌病诊断技术规程　.docxVIP

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ICS65.150B52

DB51

四川省地方标准DB51/T2466—2018

鲇拟态弧菌病诊断技术规程

2018-04-18发布2018-05-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T2466—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语与定义 1

4试剂和材料 1

5设备和器械 2

6临床检查 2

7实验室样品采集 2

8细菌分离与纯化 2

9细菌鉴定 2

10结果判定 4

11综合判定 5

附录A（规范性附录）试剂配方 6

附录B（资料性附录）拟态弧菌dnaJ基因DNA参考序列（177bp） 8

II

DB51/T2466—2018

前言

本标准依据GB/T1.1-2009给出的规定进行编写。本标准中附录A为规范性附录、附录B为资料性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准起草单位：四川农业大学。

本标准起草人：耿毅、陈德芳、韩帅、黄小丽、欧阳萍、牟维豪、赵偌璇。

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DB51/T2466—2018

鲇拟态弧菌病诊断技术规程

1范围

本标准规定了南方鲇拟态弧菌病诊断的术语与定义、试剂和材料、设备和器械、临床检查、实验室样品采集、细菌分离与纯化、细菌鉴定、结果判定和综合判定等技术规程。

本标准适用于南方鲇（Silurusmeridionalis）、黄颡鱼（Pelteobagrusfulvidraco）与杂交鲇（Silurussoldatovimeridionalis）拟态弧菌病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于文件的应用时必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T4789.7食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验

GB/T4789.28食品卫生微生物学检测染色法、培养基和试剂GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T18652致病性嗜水气单胞菌检测方法SC/T7014水生动物检疫实验技术规范

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

SC/T7201.1鱼类细菌病检疫技术规程第1部分：通用技术

3术语与定义

下列术语和定义适用于此文件。3.1

鲇拟态弧菌病

指由拟态弧菌（Vibriomimicus）感染引起南方鲇、黄颡鱼与杂交鲇等鲇鱼发病或死亡的一种细菌性疾病。

3.2

dnaJ基因

热休克蛋白40管家基因。3.3

TSATrypticSoyAgar

胰蛋白胨大豆琼脂培养基。

4试剂和材料

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DB51/T2466—2018

4.1试剂、染色液与培养基

按GB/T4789.28、GB/T18652、SC/T7014与GB/T4789.7规定执行，Taq酶、dNTPs、10×PCR缓冲液（无Mg2+）、DNA分子量标准参照物与核酸提取试剂盒等选用专业试剂公司提供的商品化试剂，上述未提及的见附录A。

4.2水

应符合GB/T6682中一级水的规格。4.3引物

dnaJ基因DNA序列扩增引物，P-F：5’-CAGGTTTGYTGCACGGCGAAGA-3’，P-R：5’-YCTTGAAGAAGCGGTT

CGTGCA-3’，—20℃保存。

5设备和器械

主要设备与器械如下：

解剖盘、剪刀、镊子、手术刀、培养皿、铂耳丝、酒精灯、普通光学显微镜、电子天平、高压灭菌锅、恒温培养箱、超净工作台、普通冰箱、高速冷冻离心机、微量移液器、PCR扩增仪、离心管和PCR管、水平电泳系统和凝胶成像系统等。

6临床检查

6.1临床症状

病鱼反应迟钝，离群独游，摄食减少或停止摄食。

6.2外部检查

病鱼头部、背部与腹侧体表出现方形或不规则形褪色斑，并逐渐发展到皮肤坏死，形成溃疡，臀鳍与尾鳍基部出血。

6.3剖检

肝肿大，斑点状出血；脾、肾肿大，呈暗红色；部分病鱼腹腔内可见少量淡黄色腹水。

7实验室样品采集

样品采集按SC/T7103执行。

8细菌分离与纯化

在无菌的环境中，从鱼的肝、肾及体表病灶组织中直接分离接种，或将样品置于无菌离心管中，用无菌盐水冲洗并捣碎，然后分离接种。样品常规划线接种TS