实验动物 鼠痘病毒检测方法 编制说明.docx

《实验动物鼠痘病毒检测方法》修订说明

一、任务来源，修订单位，主要修订人1.任务来源

2023年12月28日，由全国实验动物标准化技术委员会下达《实验动物鼠痘病毒检测方法》国家标准修订任务，结合实际需求，提出了该标准的研究和修订。

2.修订单位：山西医科大学、中国医学科学院医学实验动物所、中国食品药品检定研究院、广东省生物技术研究院、苏州西山生物技术有限公司。

3.主要修订人：宋国华、向志光、闫晓如、付瑞、徐凤姣、郭连香、贺争鸣。

二、主要工作过程

1.2024年1-3月，反复查阅大量相关资料，讨论和确定标准相关研究内容，起草了《实验动物鼠痘病毒检测方法》标准框架和编写要求，并对标准的研究进度做出安排。完成了对标准及相关资料数据的收集、整理和分析，形成标准编写框架，完成第一稿。

2.2024年5月-8月，工作组统稿，形成征求意见稿，在国标修订组内进行意见征集。

3.2024年9-11月，工作组整理汇总专家对本标准征求意见稿提出的问题，同时对标准格式进行了规范。

4.2024年12月，召开标准审查会，整理汇总会上专家提出的问题，根据意见对标准进行修改。

5.2025年2月，组织4家单位进行实时荧光PCR方法验证数据工作。

6.2025年2月，召开推荐性国家标准修订工作会，汇报标准修订进展，根据会议纪要进行修改，完成标准征求意见稿。

三、标准修订背景

1.鼠痘病毒

鼠痘（Mousepox）是由鼠痘病毒引起的一种急性致死的病毒性疾病，鼠痘病毒（Ectromeliavirus,ECTV）感染小鼠的典型临床表现为四肢、头尾肿胀、溃

疡、坏死，后期出现脚趾脱落症状，故又称脱脚病（Ectromelia）。鼠痘病毒在分类上属痘病毒科（FamilyPoxviridae）脊椎动物痘病毒亚科（sub-familyChordopoxvirinae）正痘病毒属（genusofOrthopoxvirus），核酸型为双股DNA（double-strandedDNA,dSDNA），基因组大小约为200kbp，病毒粒子呈卵圆形，直径约200nm。鼠痘病毒由动物的尿、粪便排出体外，可经皮肤伤口侵入机体，也可经呼吸道或消化道感染，还可经胎盘垂直感染胎儿，感染的胎儿通常死亡。ECTV具有暴发性流行、致死率高、对实验动物生产和科研危害严重等特点，这导致了生物医学研究基金数百万美元的损失。因此，鼠痘是无特定病原体（SPF）小鼠必须排除的病原体之一。在实验室中确认小鼠无ECTV状态至关重要。值得注意的是，由于严格的环境监测和动物SPF小鼠的改进，实验室小鼠群体中的鼠痘疫情已经消除，但感染仍然不断发生。此外，潜伏感染鼠痘的小鼠外表健康，没有任何临床症状，病毒基因存在于一定的组织或细胞中，并不产生感染性病毒,按目前常规血清学抗体检测方法一般不易检出，当在某些条件下病毒被激活后而出现急性发作。对于潜伏性感染的小鼠群难以及时察觉，危害性大。因此，有必要建立并完善快速、灵敏、合适的病毒检测和诊断和标准体系，以预防和控制ECTV感染。

2.鼠痘病毒检测方法现状

目前鼠痘病毒常规检测方法包括，抗体/抗原检测方法和PCR检测方法。

抗体检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光试验（IFA）、免疫酶试验（IEA）。其中各检测机构普遍采用间接ELISA方法，该法具有快速、简便、敏感的特点，但缺点是其对抗原的纯度要求较高，能产生抗DNA抗体的小鼠血清会出现假阳性，且不能鉴别痘苗病毒免疫抗体和小鼠痘感染所产生的抗体。IEA方法简单，敏感性和特异性不如IFA，但无需昂贵的仪器，也适宜在实验室里普及和应用。IFA法敏感度高、特异性强、简易快速且检测试剂制备简单，结果易于判断，是实验室首选的检测方法，且IFA可以捡测出早期的抗体水平。

抗原检测方法目前有免疫酶组织化学法（IH）。对于潜伏感染的小鼠没有任何临床症状，目前的血清学抗体检测方法一般不易检测出抗体，因此通常建议采用IH方法进行检测，该法能够检出抗体阴性的潜伏感染的小鼠，当外界条件发

生改变或受到各种因子的刺激，能够改变潜伏的病毒引起鼠痘的发生。由于抗原产生的时间比抗体早，所以应用抗原检测方法能够弥补抗体检测方法的缺陷。

近年来，随着分子生物学的快速发展，核酸检测技术（包括普通PCR和实时荧光定量PCR）也越来越多地用于实验动物鼠痘病毒检测中。PCR技术检测鼠痘病毒在国内的报道首先出现于1998年，可检出0.1pg的鼠痘病毒基因。应用PCR技术扩增病毒基因的特异DNA片