基因工程的基本操作程序第2课时课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

第2节基因工程的基本操作程序

第2课时

人教版(2019)选择性必修3;

能阐述基因表达载

体的构建过程。;

这就是需要构建基因表达载体。这也是培育转基因抗虫棉的核心工作

那么基因表达载体是由哪些部分组成的呢?;

新知讲授

第二步：基因表达载体的构建(核心工作)

获得了足量的Bt基因后，是否能直接将Bt基因导入棉花细胞呢?

不能。游离的DNA进入受体细胞，一般会直接被分解，即使可以转录翻译成蛋

白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。

因此，获取Bt基因后，还需要借助载体将其导入棉花细胞，才能使棉花植株获;;

①组成型启动子：每种组织器官中均发挥作用。

②组织特异型启动子：特定组织器官中才能发挥作用。

③诱导型启动子：特定条件下刺激才能发挥作用。;

原因：

①生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达；

②通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录；

③目的基因导入受体生物中需要有筛选标记；

④为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调无件，如增强子等；

⑤有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因或做成目的基因与标记基因的融合基因，如绿色荧光蛋白基因。;

新知讲授

思考4:“启动子”=“起始密码子”?

“终止子”=“终止密码子”?;

酶切后产生开环质粒

AATTC一

G

目的基因

AA

CTTAA

重组DNA分子;

思考：如何防止自身环化和反向连接的问题?

双酶切：选择2种不同的限制酶同时对目的基因和质粒切割，得到两种不同的末端，可减

少自身环化及反向连接等问题出现。;

EcoRI

子

EcoRI

启动子

表达载体

制

点表达载体

-CTTAA

公

性基

终止子

终止子

EcoRT

Bg

A

丁AG.;

农杆菌转化法(常用)

基因枪法(单子叶植物常用)

——显微注射法

——Ca2+处理法;

1.目的基因导入植物细胞

(1)花粉管通道法(我国独创)

①用微量注射器将含目的基因DNA溶液直接注入子房中；

②在植物授粉后一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴在花柱切面，使目的基因通过花粉管通道进

入胚囊。

◆实例：我国“转基因抗虫棉”;

农杆菌是生活在土壤中的微生物，自然条件下可侵染双子叶植物和裸子植物，

而对大多数单子叶植物没有侵染能力。农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA(可转移的DNA)转移到被侵染的细胞、并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。;

(2)农杆菌转化法

①转化：指目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程。

此处“转化”与肺炎链球菌转化实验中的“转化”含义相同，实质都是基因重组。②原理：

◆农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。

◆农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。

可转移的DNA;

导入

植物

细胞

植物组织培养;

新知讲授

讨论：

1.农杆菌转化法中，目的基因是否就是T-DNA,如果不是，T-DNA与目的基因是什么关系?

T-DNA不是目的基因，但它将来会被整合到宿主细胞染色体的DNA上，只要

将目的基因插入T-DNA中，目的基因就可以随T-DNA进入宿主细胞并整合到宿主

细胞的染色体上。

2.农杆菌转化法中，目的基因只能进入植物的一个体细胞中，但基因工程最终要

的是一个转基因植株，如何实现这一目标?

得到含有目的基因的植物细胞后进行植物组织培养;

②第二次拼接：

将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌

③第一次导入：

农杆菌将含目的基因的T-DNA导入受体细胞(非人工操作)

④第二次导入：

农杆菌将插入目的基因的T-DNA拼接到受体

细胞染色体的DNA上(非人工操作);

(3)过程：

构建基因表达载体并提纯

利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中

早期胚胎培养

胚胎移植;

3.将目的基因导入微生物细胞

(1)常用方法：Ca2+处理

(2)受体细胞：原核细胞