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通过人工计算检测样本浓度（适用于不能设置多样本空白的酶标仪，如大多数普通酶标仪）酶标仪对空白处理方式有限，但可设置一个空白孔单孔，所有检测孔吸光度均为之相减。第30页，共76页，星期日，2025年，2月5日各检测孔在微孔板上的位置排列方式如下：ABR1R5……BS1R1BR5B……CS2R2R6……DS3R2BR6B……ES4R3R7……FS5R3BR7B……GQR4R8……HQBR4BR8B……1234……B：空白孔S：标准孔Q：质控孔QB：质控对照孔R：标本测定孔RB：样本对照孔第31页，共76页，星期日，2025年，2月5日设置酶标仪程序时，标准浓度输入值分别为0、4.46、8.92、17.84和35.68。按“平滑曲线”方式拟合标准曲线人工计算方法：检测管实际浓度(U/L)=检测管浓度-对照管浓度。如：质控管实际浓度=Q－QB标本1实际浓度=R1－R1B第32页，共76页，星期日，2025年，2月5日结果报告标本最终检测结果以“精浆中性α-葡糖苷酶总活性”方式报告，即总活性=标本浓度(U/L)×一次射精的精液体积(ml)=mU/一次射精正常参考值≥20mU/一次射精（WHO）第33页，共76页，星期日，2025年，2月5日试验中注意事项严格控制禁欲时间和样本离心速度操作时加样要准确，混匀充分底物液直接于37℃水浴状态加入反应完毕迅速加入终止液每个样本必须做样本空白对照第34页，共76页，星期日，2025年，2月5日掌握好温度和孵育时间质控液不能加酸性抑制剂比色前微孔板应进行充分振荡（非常重要）糖苷酶抑制剂溶解后应迅速分装，-20℃冷冻保存底物见光易分解，注意蔽光保存第35页，共76页，星期日，2025年，2月5日质量控制目的评价精浆α-葡糖苷酶检测中离心速度、禁欲时间、以及冻融对精浆α-葡糖苷酶水平的影响，为精浆α-葡糖苷酶检测实现标准化及实验室内部和实验室之间的质量控制提供指导不同速度离心后的精浆中α-葡糖苷酶水平见表1、第36页，共76页，星期日，2025年，2月5日表1精浆α-葡萄糖苷酶在精浆标本2000r/min离心10min和3500r/min离心15min结果比较组别nα-葡萄糖苷酶(U/ml）精浆(2000r/minfor10minutes)5150.31±18.94精浆(3500r/minfor15minutes)5147.09±17.92*两组结果比较*:P=0.001第37页，共76页，星期日，2025年，2月5日不同速度离心后的精浆中精子密度的比较精液经2000r/min离心10min后，84.31%（43/51）的精浆含有精子，平均精子密度为(2.43±3.95)×106/ml，而经3500r/min离心15min后，23.53%（12/51）的精浆含有精子，平均精子密度为（0.22±0.87）×106/ml，结果见图1。第38页，共76页，星期日，2025年，2月5日图1不同速度离心后的精浆中精子密度的比较05101520253015913172125293337414549例数精子密度(106/ml)Centrifugationat2000r/minfor10minutesCentrifugationat3500r/minfor1
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