放射免疫荧光标记免疫.ppt

抗体：特异性强、效价高、标记后活性高标记前：梅花状双扩测效价标记抗体种类：多克隆抗体、单克隆抗体、葡萄球菌A蛋白（荧光二抗通用试剂）2.待标记抗体1mg/mL第30页，共44页，星期日，2025年，2月5日FITC（异硫氰酸荧光黄）标记抗体

Marsshall法

原理当FITC在碱性溶液中与抗体反应时，主要是抗体分子上的赖氨酸-氨基与FITC上硫碳胺键结合，一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个。3.荧光标记抗体制备与纯化

荧光素-FITC-N＝C＋N-蛋白质FITC-N–C–N-蛋白质‖‖SHHHSH第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日

操作流程抗体的准备：20mg/ml(抗体+生理盐水+碳酸盐缓冲液）碳酸盐缓冲液为总量的1/10。荧光素的准备：根据欲标记的蛋白总量，每毫克加入0.01mgFITC

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