分子生物学 重组与转座课件.ppt

分子生物学2004-研3二、重组与转座4.转座（1）细菌转座子带有抗生素抗性基因的转座子除了必要的转座元件外，还含有抗生素抗性基因，能赋予其携带者某种抗性分子生物学2004-研3二、重组与转座1.重组的类型同源重组（homologousrecombination）位点专一重组（site-specificrecombination）转座（transposition），又称异常重组（illegitimaterecombination）分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（1）同源重组的形式常发生在同源染色体之间（分子间重组），也可发生在同一DNA分子内（分子内重组）分子生物学2004-研3Examplesofrecombination分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（2）Holliday模型说明同源重组的一个经典模型，基于重组过程中有十字形的中间产物分子生物学2004-研3TheHollidaymodelofrecombination分子生物学2004-研3ResolutionofaHollidayjunction分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（3）RecBCD重组途径存于E.coli中，需要RecBCD蛋白（RecBCDprotein，recB、recC、recD基因的产物）的参与分子生物学2004-研3TheRecBCDpathwayofhomologousrecombinationSSB:single-strandedDNA-bindingprotein分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（3）RecBCD重组途径RecA38kD的蛋白质，具多种功能，其中一种就是在重组中促进同源DNA单链的交换（主要是一单链与一双链中的同源单链交换）；交换过程需ATP分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（3）RecBCD重组途径RecBCD一种具多功能的酶依赖于DNA的ATPase（水解ATP，为DNA的解螺旋提供能量）DNAnuclease，可作用于单链或双链DNA，切割χ位点（GCTGGTGG）χ(chi):crossoverhotspotinstigatorDNAhelicase活性RecBCD的切点与底物（序列）有关，可在χ位点3’端4~6nt分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（3）RecBCD重组途径RuvA和RuvB两者均具DNAhelicase活性（RuvB还有ATPase活性），且两者一起才能与DNA很好地结合（RuvA先结合，然后RuvB才能结合）它们专门与Hollidayjunction这样一种结构结合，促使branchmigration发生RuvA和RuvB与Hollidayjunction的结合位置十分特异分子生物学2004-研3ThebindingsitesofRuvAandRuvB分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（3）RecBCD重组途径RuvC解开Hollidayjunction所需的一种核酸酶，能特异地与Hollidayjunction结合，并在特异位点切开Hollidayjunction分子生物学2004-研3ResolutionofaHollidayjunction分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（3）RecBCD重组途径RuvCRuvC是二聚体，有2个活性位点，因此能切开Hollidayjunction中的两条链切割位点必须有特异的序列，因此，必须通过branchmigration到达特异序列后，RuvC才能起作用（Hollidayjunction两种解开方式的相对多寡取决于两对同源单链上所具有的RuvC切割位点的相对多寡）分子生物学2004-研3ConsensussequenceofRuvCcleavagesites分子生物学2004-研3二、重组与转座2.同源重组（4）减数分裂重组（meioticrecombination）真核生物中常见的重组，与细菌中的重组有不少相似之处，但在起始的步骤有较大的差异（有DNA双链断裂，double-strandedDNAbreak）分子生物学2004-研3Modelformeioticrecombinationin