DB13T 1113-2009 食品中总抗生素残留的快速测定 微生物抑制法.docx

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DB13

河北省地方标准

DB13/T1113—2009

食品中总抗生素残留的快速测定微生物抑制法

ExaminationofResidueofantibioticsinfood——MIAmethod

2009-05-27发布2009-06-11实施

河北省质量技术监督局发布

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DB13/T1113—2009

前言

本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。

本标准起草单位：河北省食品安全重点实验室、河北医科大学基础医学院、河北师范大学生命科学学院。

本标准主要起草人：吕品、周巍、张岩、周正、李挥、穆燕魁、刘敬泽、杨小龙、赵宝华。

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DB13/T1113—2009

食品中抗生素残留的检测方法

1范围

本标准规定了食品中抗生素残留的检验方法。

本标准第一法适用于肉、蛋和饲料中总抗生素残留的检测；本标准第二法适用于乳和乳制品中总抗生素残留的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T4789.27食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留检验。

第一法肉、饲料和蛋中抗生素残留的检测方法

3原理

抗生素残留检验试剂盒的原理是基于抑制微生物生长。试剂盒是以96孔板的形式来设计，每个小孔里面都含有均匀扩散了芽孢杆菌孢子的琼脂培养基，同时还含有氧化还原指示剂。当试剂孔在65℃培养时，孢子开始被激活，并且生长繁殖，细胞的生长改变了培养基里面的氧化还原潜力，使琼脂的颜色从蓝色变成橘红色(橙色)。如果样品内的抗生素浓度超过了试剂盒的检测限，则孢子就不会被激活，细菌就不会生长繁殖，琼脂的颜色不会改变。

4试剂

4.1检测板。

4.2抗生素残留检测试剂盒。

4.3粘胶纸。

4.4PBST:45gNaCl,80mL的磷酸氢二钾溶液(0.5M),16.7mL的磷酸二氢钾溶液(0.5M),5mL吐温20,调节PH到7.4。

5仪器

5.1恒温培养箱：65℃±1℃。

5.2天平：感量0.1g。

5.3无菌吸头。

5.4无菌试管。

5.5无菌锥形瓶。

5.6离心机。

5.7均质器。

5.8磁力搅拌器。

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5.9酶标仪。

6操作步骤

6.1样品的前处理

6.1.1鲜肉样品

取3g±0.5g没有脂肪或者其他组织的一片瘦肉样品，剪成小碎片；把瘦肉样品放入玻璃杯或者直径1.5cm的耐热塑料管中，密封；在100℃的水浴中加热3min±0.5min;把试管浸在冷水中降温；用镊子来压榨尽可能多的肉汁，丢掉肉，留下肉汁；把肉汁在2000r/min下离心3min,取上清液待测。

6.1.2肝脏

切取5g±0.5g肾带皮和髓汁在内；把样品放入玻璃杯或者直径1.5cm的耐热塑料管中，密封；在100℃的水浴中加热4min±0.5min;把试管浸在冷水中降温；2000r/min下离心3min,取上清液待测。

6.1.3饲料

称取1g±0.01g均匀的饲料样品，放入清洁的试管密封；加20mL的预热后PBST(约40℃);均质混合样品液30min,使用磁力搅拌器直到样品全部溶解；2000r/min下离心15min,取上清液待测。

6.1.4蛋样品

把蛋黄和蛋白都放进清洁的容器，然后拍打得到均匀的液体，不能有块状；用蒸馏水按1:4的比例将样品稀释成均匀的液体(1mL样品+3mL水),装在玻璃杯或者是直径1.5cm的耐热塑料管中，密封；在100℃的水浴中加热样品12min±0.5min;用力搅拌样品20s~30s避免样品凝结成块状，在室温冷却样品，待测。

6.2检测过程：

先用刀切开所需要检测的小孔，从底部用力把切好的小孔顶出微孔板架。把带检测的试剂条上的铝薄纸撕去，每个小孔加100μL的样品，同时做一个阴性对照样(加100μL的阴性控制样)。用粘胶纸把加好样的小孔密封好，放入65℃的恒温器中培养30min,使样品充分均匀扩散开来。倒空扩散后的样品液，用蒸馏水冲洗样品孔，如果使用微量加样枪时每个孔需要加30