DB13T 1109-2009 食品中过敏原卵蛋白的测定 酶联免疫法.docxVIP

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DB13

河北省地方标准

DB13/T1109—2009

食品中过敏原卵蛋白的测定酶联免疫法

Determinationofeggproteininfoods

Enzyme-linkedimmunosorbentassaymethod

2009-05-27发布2009-06-11实施

河北省质量技术监督局发布

I

DB13/T1109—2009

前言

本标准由河北省质量技术监督局提出。

本标准起草单位：河北医科大学基础医学院、河北省食品安全重点实验室、河北省食品质量监督检验研究院。

本标准主要起草人：吕品、张岩、李挥、周正、李丛芬、刘东、王丽霞、刘辰魁、范斌、康素芬。

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DB13/T1109—2009

食品中过敏原卵蛋白的测定酶联免疫法

1范围

本标准规定了食品中过敏原卵蛋白的酶联免疫测定方法。本标准适用于面制品和冷冻饮品中过敏原卵蛋白的测定。本部分的方法检出限：0.6mg/kg

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

样品中的卵蛋白与试剂盒中微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗卵蛋白的抗体，加入酶标抗体后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含卵蛋白的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样品中卵蛋白的含量。

4试剂和材料

除非另有说明，在分析中均为分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。

4.1卵蛋白检测试剂盒。

4.1.148孔板：6条×8孔(涂布有抗蛋清蛋白的抗体)。

4.1.2全蛋粉标准溶液：0mg/L,0.5mg/L,1.5mg/L,4.5mg/L,13.5mg/L。

4.1.3酶标抗体。

4.1.4染色液。

4.1.5终止液。

4.1.610倍浓缩洗涤液。

4.1.720倍浓缩萃取液。

4.2萃取工作液：用水将20倍浓缩萃取液按1:19体积比进行稀释，萃取工作液在4℃环境可保存一个月。

4.3洗涤工作液：用水将10倍浓缩洗涤液按1:9体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月

5仪器

5.1酶标仪：具450nm滤光片。

5.2单道移液器：20μL～200μL和200μL~1000μL。

5.3漩涡混匀器。

5.4冷冻离心机。

5.5刻度吸量管.

5.6均质器。

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DB13/T1109—2009

5.7水浴锅。

6分析步骤

6.1提取

准确称取均质样品1.0g于50mL离心管中，加入20mL预热至60℃的稀释萃取液，60℃水浴10min;2500r/min低温(4℃)离心10min;过滤上清液；取100μL用于分析。

6.2测定

6.2.1分别吸取取100μL标准工作溶液或样品溶液到对应的微孔中，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后室温反应10min。

6.2.2小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液(250μL/孔),充分洗涤4~5次，每次间隔

10s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。

6.2.3每孔加入酶标二抗100μL,轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后室温反应10min,取出重复洗板步骤6.2.2。

6.2.4每个孔中加入染色液100μL,用盖板膜盖板后室温反应10min。

6.2.5每孔加入终止液100μL,轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔吸光度值。

6.3空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

6.4监控试验

每次测定均应做一个添加蛋清蛋白标准的显色剂样品。

7结果计算

以吸光度值为纵坐标，蛋清蛋白标准工作溶液浓度为横坐标，绘制半对数标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的蛋清蛋白浓度后，结果按公式(1)计算：

式中：

X——试样中蛋清蛋白残留量，单位为微克每千克(mg/kg);

从标准工作曲线上得到的试样中蛋清蛋白浓度，单位为微克每升(mg/L);V-—样品溶液的体积，单位为毫升(mL);

m——样品溶液所含的试样质量，单位为克(g)。结果表示到小数点后两位。

注：计算结果应扣除空白值