DB34_T4487-2023_水禽坦布苏病毒和星状病毒双重PCR检测技术规程_安徽省.docxVIP

ICS65.020.20

CCSB31

34

安徽省地方标准

DB34/T4487—2023

水禽坦布苏病毒和星状病毒双重PCR检测

技术规程

TechnicalregulationfordoublePCRdetectionmethodofwaterfowlTembusuvirus

andAstrovirus

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T4487—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则

第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽农业大学提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：安徽农业大学、安徽省动物疫病预防与控制中心、滁州市动物疫病预防与控制中

心、定远县畜牧兽医局、合肥华盟生物技术有限公司、安徽省皖西白鹅原种场有限公司。

本文件主要起草人：王桂军、朱良强、许青华、李文来、郑举、范亚楠、何长生、解新迪、张云凯、

段倩倩、伍唯、张新。

I

DB34/T4487—2023

水禽坦布苏病毒和星状病毒双重PCR检测技术规程

1范围

本文件规定了水禽坦布苏病毒和星状病毒双重PCR检测方法的主要仪器设备、试剂、引物与标准

品、操作步骤、结果判定、生物安全管理及废弃物处理。

本文件适用于水禽坦布苏病毒和星状病毒核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则

SN/T4835实验室生物废弃物管理要求

下列术语和定义适用于本文件。

坦布苏病毒Tembusuvirus

坦布苏病毒(Tembusuvirus,DTMUV)属于黄病毒科(Flauiviridae)、黄病毒属(Flaoivirus)。

坦苏病毒病(Tembusuvirusdisease):是由坦布苏病毒引起的鸭的一种传染病，感染该病的种鸭

通常会引起严重的产蛋率下隆、共济失调，卵巢出血、发炎的现象。

星状病毒Astrovirus

星状病毒(Astroviruses,AstV)是一种圆形、无囊膜、单股正链RNA病毒，其直径为25～35nm。

因在电子显微镜下，病毒表面有5～6个突起，结构呈星形，故称之为星状病毒。

星状病毒病，一种由星状病毒引起以内脏和关节痛风为主要症状的传染性疾病，可引起雏鹅腹泻性

肠炎、肾炎及尿酸盐沉积等症状，是引发雏鹅痛风的重要原因之一。

1

DB34/T4487—2023

冰箱：-20℃；-80℃。

微波炉。

分析天平：精确度0.001g。

水浴锅。

微量移液器：2.5μL、10μL、20μL、200μL、1000μL。

超净工作台。

5试剂

RNA抽提试剂：Trizol或其他商品化RNA提取试剂。

氯仿、异丙醇、无水乙醇：为分析纯。

ReactionBuffer(5×)，dNTPMix，反转录酶，TaqDNA聚合酶，RNaseInhibitor(20U/μL)、

RandomHexamerprimer。

1×TAE电泳缓冲液：配制方法见附录A。

0.1MpH7.4PBS：配制方法见附录A。

DNA分子标准

1％琼脂糖凝胶：配制方法见附录A。

灭菌超纯水：符合GB/T6682的规定，121℃、20min，高压蒸汽灭菌。

ddH2O：双重蒸馏水。

6引物与标准品

应按照NY/T541的规定执行，无菌采集感染或病死禽类各种组织与器官（肝脏、脾脏、肾脏）。

取待检组织样品适量（1g)，按1:5倍（W/W)加入无菌0.1MpH7.4PBS，于灭菌并烘干的研钵

或组织匀浆器中充分研磨，反复冻融3次后，4℃8000rpm/min离心20min，取上清1mL转至无

菌的1.5mL离心管中，编号备用。

2

DB34/T4487—2023

RNA提取

7.2.1用Trizol或其他商品化RNA提取试剂提取待测样品。

7.2.2200μL样品和1mLTrizol加入EP管中，4℃裂解10～20m