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《荧光强度定量测定的荧光校准》草案

Fluorescencecalibrationinquantitativefluorescence

measurement

技术：临床检验标准专业

起草人：王兰兰

起草单位：大学华西医院

起始年：2012年12月

完成年限：2013年12月

前言

荧光素在生物医学研究和临床检测中广泛应用，但目前我国尚无统一的标准文件

荧光检测方法，但本标准中主要针对流式细胞分析的细胞和微球的荧光定量，包括细胞免疫

分型、悬浮技术，旨在完善我国荧光定量分析中如何规范使用参考物质和进行操

作。

在过去四十年，荧光标记和检测成为了生物医学检测最常用的信号分子。荧光检测可应

用于微球，凝胶微斑，悬液，或三维组织切片分析。发展于20试剂40年代的荧光抗体技术是

现在生物医学常用检测方法的基本原理。荧光显微技术在时生物学、医学和公共卫生

中的重要工具。荧光细胞术检测技术和生物医学应用的结合；荧光成像技术用于分析高密度

微阵列，实现多个靶目标分析。多荧光检测可实现单一样本中多个指标的同时检测，这种高

通量、低成本的或蛋白质检测技术为改善人类医疗，人群大规模筛选以建立疾病谱等提

供了良好的机会。

近年来，流式细胞术对荧光检测系统以完全方式进行规范，本标准中参考流式细

胞检测系统进行定量荧光校准，主要建立了荧光定量校准的基本原理和操作基础。本标准用

于指导荧光检测技术，包括流式细胞术和荧光微球或微阵列的应用者。

荧光强度定量测定的荧光校准

1范围

本标准涉及荧光定量校正的基本原理和必要程序，主要包括荧光的特性背景描述，测量

荧光强度仪器的一般特征，荧光素参考液，参考颗粒，荧光标记配体的使用和特征等内容，

用于指导荧光检测相关的细胞或颗粒分析等。本标准适用于以细胞，微球，微阵列，酶标板

和图像分析仪进行配体结合分析的荧光检测技术使用者。

2专业词汇及其缩写

3荧光强度检测

3.1光辐射，荧光，辐射测量

3.2荧光强度的影响因素

3.2.1仪器影响因素

3.2.1.1检测体积

3.2.1.2反应性

3.2.2荧光素

3.2.2.1浓度和摩尔数定量

3.2.2.2环境效应对量子产生、光谱特征的影响

3.2.2.3过滤效应

3.2.2.4极化作用

3.2.3光漂白

3.2.3.1静态和动态的光漂白

3.2.3.2荧光能量转换

3.2.3.3二聚体和受激分子的形成

3.2.3.4温度

3.2.3.5其他环境因素

3.2.4光降解

3.2.5干扰因素

3.2.5.1荧光背景

3.2.5.2弹性光散射