新解读《GB_T 38485 - 2021微生物痕量基因残留测定 微滴数字PCR法》最新解读.pptxVIP

《GB/T38485-2021微生物痕量基因残留测定微滴数

字PCR法》最新解读

一、标准核心概览：开启痕量基因检测新篇

（一）微生物痕量基因残留定义剖析

微生物痕量基因残留指微生物加工产品在后续分离纯化中极难去除的核酸，其含量在100pg/mL以下。这些残留基因虽微量，却可能对产品质量、安全以及后续应用产生重大影响。在食品加工中，痕量的有害微生物基因残留可能引发食品安全问题，威胁消费者健康；在生物制药领域，宿主细胞的痕量基因残留可能干扰药品的疗效和安全性。对其精准测定意义非凡，一方面能保障产品质量符合严格标准，另一方面为生产工艺的优化提供关键依据，助力企业提升产品品质，增强市场竞争力。;

（二）微滴数字PCR法独特原理

微滴数字PCR法利用液滴微流控技术，将待测生物样品所残留的目标核酸PCR扩增体系分割成几十份到几万份包含一个拷贝的核酸分子微升级油包水微滴。这一过程如同将庞大的核酸检测体系细化为无数个微小的

“战场”，每个微滴成为独立的反应单元。之后按照常规PCR体系对微滴进行扩增，并通过荧光探针实现信号读出。最终，所产生微滴阳性信号的数目代表了原始样本中目标核酸分子的拷贝数，从而能够直接数出目标核酸分子的个数，实现对起始样品痕量基因残留的精确定量。与传统PCR相比，该方法不依赖Ct值或内参基因，就能确定低至单拷贝的待检靶分子的绝对数目，大大提高了检测的准确性和灵敏度。;

（三）标准适用范围深度解读

本标准适用于加工产品中酿酒酵母和植物乳杆菌痕量特征基因残留（100pg/mL以下）的测定。在食品行业，许多发酵产品如面包、酒类等会涉及酿酒酵母，通过该标准可检测产品中酿酒酵母痕量基因残留，判断发酵过程是否彻底或是否存在外来污染。植物乳杆菌常用于发酵蔬菜、酸奶等产品，对其痕量基因残留测定有助于把控产品品质。从更广泛的行业视角看，该标准为食品、生物制药、发酵工业等提供了统一、规范且精准的微生物痕量基因残留测定方法，推动各行业在质量控制、安全保障等方面迈向新台阶，促进产业的健康、可???续发展。

二、技术优势洞察：引领痕量检测高灵敏时代;

（一）灵敏度飞跃：捕捉极微量基因残留

1.单分子检测能力：微滴数字PCR技术能够检测单个DNA分子的存在，其灵敏度比传统PCR技术高出几个数量级。在传统PCR中，由于检测下限的限制，对于极低含量的基因残留可能无法有效检测，导致漏检风险。而微滴数字PCR通过将反应体系微滴化，使绝大多数微滴内仅含有0个或1个模板分子，大大降低了检测下限，能够精准捕捉到极微量的基因残留。在检测一些罕见病原体的痕量基因时，传统PCR可能无法给出准确结果，而微滴数字PCR却能凭借其单分子检测能力，清晰地判断基因的存在及拷贝数。

2.极低检测限：该技术可以有效检测出低至

100pg/mL以下的微生物痕量基因残留。这一极低的检;

测限在众多领域具有重要意义。在生物制药过程中，对

宿主细胞DNA残留量的控制要求极为严格，极微量的残留都可能影响药品的安全性和有效性。微滴数字PCR的低检测限能够满足这一严苛需求，准确测定痕量的宿主细胞基因残留，确保药品质量。在环境监测中，对于水体、土壤中可能存在的微量有害微生物基因，也能通过该技术及时发现，为生态安全提供保障。

（二）准确性提升：减少误差与假阳性

1.避免非特异性扩增：通过合理设计引物和探针，微滴数字PCR能够有效避免非特异性扩增导致的假阳性结果。引物应仅与目标微生物的DNA序列特异性结合，避免与非目标序列发生非特异性结合。探针的序列与目标序列的扩增产物完全互补，且长度适中，在PCR扩;

增过程中能与扩增产物特异性结合。在检测酿酒酵母痕

量基因时，针对酿酒酵母特定的基因序列设计引物和探针，使得只有酿酒酵母的基因能够被扩增和检测，大大减少了其他微生物基因干扰产生假阳性的可能性。

2.基于泊松分布的精准定量：依据泊松分布原理对阳性微滴的个数与比例进行分析，从而得出靶分子的起始拷贝数或浓度，这种定量方式更为精准。在传统PCR

中，定量结果受多种因素影响，如扩增效率的差异、反应条件的波动等，导致定量准确性受限。而微滴数字

PCR通过将反应体系分割为大量独立的微滴，每个微滴的扩增反应相对独立，减少了这些因素的干扰。通过对大量微滴的统计分析，依据泊松分布原理能够更准确地计算出靶分子的起始拷贝数，为痕量基因残留的定量提供了可靠依据。;

（三）高通量潜力：适配大规模检测需求

1.大量微滴并行检测