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第2章第2节动物细胞工程第一课动物细胞培养
动物细胞培养一/动物细胞培养的条件1/动物细胞培养的过程2/干细胞培养及其应用3/
治疗大面积烧伤时,通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说,自体健康皮肤非常有限,使用他人皮肤来源又不足,而且会存在免疫排斥反应。那么,怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢?能不能用自体皮肤的单个细胞培养出人的皮肤呢?可以从病人身上取少量正常、健康的皮肤在体外进行培养、扩增。目前,科学家还在研究对皮肤干细胞进行培养,以获得适合临床上使用的人造皮肤。通过细胞培养构建的人造皮肤
一动物细胞的培养任务一:阅读教材P43-44关于动物细胞培养的条件,回答下列问题。1.动物细胞工程常用的技术?2.什么是动物细胞培养?3.动物细胞培养需要哪些条件?4.多数细胞生存的PH是多少?温度多少为宜?5.培养动物细胞需要哪些气体?6.什么是合成培养基?7.培养动物细胞一般采用液体培养基还是固体培养基?需要加入什么天然成分?
一动物细胞的培养任务一:阅读教材P43-44关于动物细胞培养的条件,回答下列问题。1.动物细胞工程常用的技术?2.什么是动物细胞培养?3.动物细胞培养需要哪些条件?4.多数细胞生存的PH是多少?温度多少为宜?动物细胞培养、动物细胞融合、动物细胞核移植等从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术营养、无菌无毒环境、温度、PH和渗透压、气体环境7.2-7.4必须加入:葡萄糖(首选碳源)、氨基酸、维生素、核苷酸、蛋白质、脂肪酸、无机盐和促生长剂(36.5±0.5)℃
一动物细胞的培养任务一:阅读教材P43-44关于动物细胞培养的条件,回答下列问题。6.什么是合成培养基?7.培养动物细胞一般采用液体培养基还是固体培养基?需要加入什么天然成分?将细胞所需要的营养物质按种类和所需要量严格配置而成的培养基液体培养基5.培养动物细胞需要哪些气体?O25%CO2通常需要加入动物血清动物血清为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境血清中也包含了一些动物的激素,可以促进细胞的发育。用于药物生产等的细胞通常不再加入血清,需要添加激素和促生长因子。O2:有氧呼吸5%CO2:维持培养液PH(NaHCO3处于动态平衡)操作:培养皿或者培养瓶放入CO2培养箱中培养
二动物细胞培养的过程任务二:阅读教材P44-45关于动物细胞培养的过程,回答下列问题。1.什么方法分散组织细胞?2.体外培养动物细胞分为哪两类?3.哪些因素抑制悬浮生长和贴壁生长细胞的分裂?4.什么是原代培养?什么是传代培养?5.幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较,分化程度低的细胞与分化程度高的细胞比较?哪些细胞更容易培养?原因是什么?
任务二:阅读教材P44-45关于动物细胞培养的过程,回答下列问题。1.什么方法分散组织细胞?细胞间的组要成分是什么?2.体外培养动物细胞分为哪两类?3.哪些因素抑制悬浮生长和贴壁生长细胞的分裂?用机械的方法,或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理的方法(注意处理时间)悬浮生长、贴壁生长贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞通常会停止分裂增殖悬浮生长因细胞密度过大、有害代谢积累和培养液中营养物质缺乏癌细胞由于无接触抑制而能够继续移动和增殖不能采用胃蛋白酶,胃蛋白酶最适PH2-3,多数动物细胞培养的PH7.2-7.4,酶失活动物细胞培养的过程二补充:淋巴组织等柔软组织采用在滤网上挤压、研磨的方法;脾脏细胞可以采用冲洗;血液中细胞可以采用密度梯度离心的方法。细胞间的组要成分:蛋白质
动物细胞培养的过程二任务二:阅读教材P44-45关于动物细胞培养的过程,回答下列问题。癌细胞表面糖蛋白减少
任务二:阅读教材P44-45关于动物细胞培养的过程,回答下列问题。5.幼龄动物的细胞与老年动物的细胞比较,分化程度低的细胞与分化程度高的细胞比较?哪些细胞更容易培养?原因是什么?细胞的增殖能力与供体的年龄有关,幼龄动物的细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛,老龄动物的细胞则相反。所以,一般来说,幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞易于培养。同样,分化程度越低的细胞,增殖能力越强,所以更容易培养。动物细胞培养的过程二4.什么是原代培养?什么是传代培养?分瓶之前的细胞培养,即动物组织经处理后的初次培养将分瓶后的细胞培养称为传代培养注意:“代”不是分裂次数
动物细胞培养的过程二去掉上清液的胰蛋白酶①②
动物细胞培养的过程二为什么要将动物细胞分散成单个细胞培养?细胞原代培养:可以分散成单个细胞培养,也可以用细胞群(团)或组织块培养,细胞传代培养:都要分散成单个细胞培养。?分散成单个细胞后容易培养,细胞所需的营养容易供应,其代谢废物容易排出。而用大块组织培养时,很难在体外长时间生存和
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