好氧甲烷氧化细菌Methyhila碳氮多途径代谢研究.pdfVIP

哈尔滨工业大学硕士学位论文

摘要

Methylocystisbryophila是一种典型好氧甲烷氧化细菌，是最早被描述且被历史

上公认的好氧甲烷氧化细菌属之一，在自然界广泛存在，并已经被人为富集和纯培

养。目前，关于Methylocystisbryophila的代谢规律及自然分布的研究很少，鉴于

其所处的自然生态系统的恶劣条件，阐明碳和氮代谢的代谢规律有助于了解菌株

的潜在生理适应性，丰富对微生物驱动的地球氮素循环和碳素循环的认知。本研究

探索了以甲烷为唯一外加碳源，M.bryophila利用不同氮源在不同条件下进行碳氮

多途径代谢的可行性。

在不同底物和氧气浓度条件下进行代谢实验，探究微生物进行好氧甲烷氧化

耦合反硝化途径的可行性，发现M.bryophila可以在以甲烷为外加碳源的条件下还

原硝酸盐和亚硝酸盐发生好氧甲烷氧化耦合反硝化作用（AME-D），并可以利用二

者进行同化作用生长。微生物可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐：微氧条件下硝酸盐的

去除率比氧气充足条件下高29.84%，反硝化代谢更强；而在氧气充足的条件下，

微生物更倾向于利用硝酸盐进行同化生长，OD增长较微氧条件下高0.34。微生物

可以进一步还原亚硝酸盐：氧气充足条件更有利于亚硝酸盐代谢，NO2-去除率较微

氧条件下高45.28%，也更有助于微生物利用亚硝酸盐进行同化生长，OD增长较

微氧条件下高0.34；另外在实验过程中发现微生物可以将亚硝酸盐转化为硝酸盐，

因此推测在氧气充足条件下微生物可以发生硝化作用，并且O/CH越低，硝化作

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用越强；微氧条件下微生物更倾向于利用亚硝酸盐进行反硝化过程而不发生硝化

作用，亚硝酸盐浓度越低，越有利于微生物进行亚硝酸盐解毒和微生物的生长，在

NO2-为5mg-N/L时，最高去除速率可达1.92mg-N/L/d，最大去除效率为100%，

OD最高涨幅为0.12，并且在亚硝酸盐浓度高于20mg-N/L时微生物基本丧失生长

代谢活性。

在不同共底物条件下进行代谢实验，探究微生物进行氨氧化及多途径反硝化

的可行性，发现M.bryophila可以利用氨氮、羟胺以及羟胺耦合硝酸盐/亚硝酸盐进

行生长代谢：在有外加碳源的条件下可以利用氨氮，无外加碳源条件下能够利用羟

胺和羟胺与硝酸盐/亚硝酸盐进行共代谢发生反硝化作用，并能够支持微生物生长。

在进行氨氮代谢时，O/CH越高越能促进菌种的生长和氨氮的去除，在O/CH为

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2时，最高代谢速率可达4.32mg-N/L/d，最大去除效率为43.16%，OD最高涨幅

为0.37，而在无碳源条件下基本不能进行氨氮代谢；在代谢羟胺时，微生物可以利

用氧气将羟胺氧化为硝酸盐或亚硝酸盐，羟胺去除速率可达到0.28mg-N/L/h；在

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提供羟胺代替甲烷作为电子供体时，微氧条件下微生物可以利用硝酸盐和亚硝酸

盐作为电子受体，发生反硝化作用并进行同化生长，可以产生亚硝酸盐和NO，羟

2

胺的去除速率分别为0.21mg-N/L/h和0.019mg-N/L/h，硝酸盐和亚硝酸盐去除速

率分别为0.76mg-N/L/h和0.052mg-N/L/h，NO产生的速率分别为0.064mg-N/L/h

2

和0.002mg-N/L/h。

关键词：好氧甲烷氧化细菌；Methylocystisbryophila；反硝化；氨氧化