梅毒实验室诊断.pptVIP

快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)RPR用于脑脊液的检测，近年来也有不少研究。有作者在对154例各期梅毒患者及90例非梅毒神经系统疾病患者的脑脊液进行试验并作统计分析：RPR脑脊液敏感性为99.1%、特异性为77.8%VDRL脑脊液敏感性为98.6%、特异性为70.4结论：RPR可以代替VDRL用于神经梅毒的诊断。但是？第61页，共112页，星期日，2025年，2月5日快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)注意事项1、使用无菌生理盐水；标本无严重脂血、溶血和细菌污染2、正确操作，移液器吸头保证在血清/血浆液面以下但不能接触反应纸板；防止产生气泡；3、每批次标本数量不宜过多，防止干燥或血清水分挥发，4、实验前应检查水平旋转仪转速，常规进行质量控制；5、稀释后摊开液面是顺序应从低浓度向高浓度进行；6、反应完毕应及时观察结果。第62页，共112页，星期日，2025年，2月5日梅毒螺旋体抗原血清学试验试验原理：以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者几乎终生阳性。第63页，共112页，星期日，2025年，2月5日梅毒螺旋体抗原血清学试验试验方法：（1）梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）（2）梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）（3）梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）（4）梅毒免疫层析法—梅毒快速检测（RT）（5）荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）（6）化学发光免疫分析法（CLIA）（7）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）第64页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA/TPHA感染梅毒螺旋体后2-4周内，机体会产生特异的梅毒螺旋体抗体。TPPA具有较高的敏感性和特异性。是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的金标准。第65页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA试验原理图第66页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA试验仪器耗材（1）试剂盒“A”溶解液：用于溶解致敏颗粒“C”和非致敏颗粒“D”“B”血清稀释液：用于血清标本的稀释“C”冻干的致敏颗粒“D”冻干的非致敏颗粒“E”阳性质控血清：为含梅毒抗体的兔血清制品，最终滴度1:320，（2）微量振荡器（3）移液器及吸头（4）保湿盒第67页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA试验检验流程（1）试剂准备：试验前复温30分钟（2）加稀释液（B液）（3）标本稀释（4）加致敏、未致敏颗粒（5）混合：微量振荡器震荡30秒（6）反应：置湿盒，15-30℃至少2小时（7）观察凝集反应强度第68页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA试验检验流程稀释液100ul标本25ul1:5稀释液25ul1:10稀释液25ul1:20稀释液25ul1:40吸取25ul吸取25ul吸取25ul弃掉25ul未致敏粒子致敏粒子℃第69页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA试验结果判读首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第3孔）如出现凝集，则为无效试验。如无凝集，则根据致敏粒子反应孔标本与致敏粒子是否产生1+-4+凝集反应，判断结果。第70页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA凝集反应分级4+：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠；3+：粒子光滑覆盖大部分孔底；2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环；1+：粒子光滑聚集覆盖孔子，周围有一明显细胞环；±：粒子沉集孔底，中央形成一小点；—：粒子紧密沉积孔底中央。第71页，共112页，星期日，2025年，2月5日第72页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA结果报告未致敏粒子反应孔不出现凝集，致敏粒子反应孔出现凝集反应报告阳性（+）；未致敏粒子与致敏粒子反应孔均未出现凝集反应报告阴性（-）第73页，共112页，星期日，2025年，2月5日TPPA重吸收试验如标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集者，标本需作重吸收试验：（1）加0.95ml非致敏颗粒溶液于小试管内；（2）加入0.05ml血清充分混匀，置室温吸收30分钟以上；（3）2000r/min离心5分钟，吸取上清液0.05ml加入第3孔；（4）第4孔加血清稀释液