DB23T-大豆菌核病田间接种技术规程.docVIP

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黑龙江省市场监督管理局发布XXXX-XX-XX实施

黑龙江省市场监督管理局发布

XXXX-XX-XX实施

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大豆菌核病田间接种技术规程

（征求意见稿）

起草单位：黑龙江省农业科学院大豆研究所

联系人：王家军

联系电话邮箱：junjiawang@163.com

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DB23

黑龙江省地方标准

ICS65.020.20

CCSB05

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前??言

本文件按GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的编写规则起草。

请注意本文件的某些部分可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由黑龙江省农业农村厅提出。

本文件起草单位：黑龙江省农业科学院大豆研究所、黑龙江省农业科学院植物保护研究所。

本文件主要起草人：王家军、孟庆林、李易初、马立功、于佰双、王广金、张必弦、马云凤、高明杰、刘秀林、张瑞萍、王雪扬、李进荣、任红雷、张丰屹、何雯瑾、代丽婷、崔丽伟。

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大豆菌核病田间接种技术规程

范围

本文件规定了大豆菌核病人工接种鉴定技术的术语与定义、技术流程、评价标准和技术档案。

本规程适用于大豆资源、品种（系）等材料对菌核病抗性的人工鉴定和评价。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB3095-2012环境空气质量标准

GB4404.2粮食作物种子豆类

GB5084-2005农田灌溉水质标准

GB15618土壤环境质量标准农用地土壤污染风险管控标准（试行）

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

菌种纯化

挑取大豆菌核病菌的单个子囊孢子，将其放置于新鲜的PDA平皿上，以获得新生菌落的方法。

3.2

活化培养

将中、长期低温保存的菌种，重新在新鲜PDA平皿上培养的过程。

3.3

菌种扩繁

将活化的菌种接种在新鲜的马铃薯-胡萝卜培养基上培养，获得大量菌核的过程。

3.4

鉴定圃

按不同试验设计的目的和要求设定的待接种大豆材料的供试小区。

3.5

人工接种

在适宜条件下，通过人工操作将接种体放于植物体感病部位并使之发病的过程。

3.6

接种体

能够侵染大豆植株并引起病害的病原体。

3.7

抗病性

植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。

4环境条件

本规程大豆菌核人工接种鉴定时的环境条件，环境空气质量应符合GB3095-2012标准规定；土壤环境质量应符合GB15618-2018二级标准；农田灌溉用水质量应符合GB5084-2005标准规定。

5技术流程

5.1鉴定圃的建立与小区设计

选择易发病环境条件的较为中间的整块田块。在鉴定圃内种植待测材料。依据试验材料的数量，在鉴定圃内布局若干个小区，小区内种植待测供试大豆材料，小区设置为2行区，行距为65cm，株距7cm，行长5米，设置3次重复。

5.2田间管理

大豆种植全过程在常规管理的基础上，创造有利于菌核病发病的条件。大豆生长过程中可防虫、除草，但不能施用任何杀菌剂。在大豆生长的中后期，若发生倒伏，需及时地搭建竹架。

5.3接种鉴定

5.3.1接种体制备

菌核的制备：核盘菌菌株经活化培养后，接种于灭菌的马铃薯--胡萝卜培养基上，在18℃～20℃的培养箱中暗培养4周，待产生黑色坚硬菌核后，用清水洗出其中菌核，阴干，保存，备用。

子囊孢子悬浮液的制备：将菌核埋入潮湿的灭菌沙中置于5℃冰箱进行低温处理，4周后取出置于装有湿沙的发芽盒中，于20℃下黑暗培养，待产生子囊盘柄后添加200Lux的光照，待子囊盘弹射孢子时，收集子囊孢子，用无菌水稀释成相应浓度，用于喷雾接种。

5.3.2接种方法

田间菌核接种，于小区播种后按每延长米0.5g，将菌核均匀施于试验区垅沟内，覆土5cm。试验区正常进行中耕。若大豆花期气候干旱，可对试验区进行微喷灌，保持土壤湿润。

子囊孢子悬浮液接种：于大豆盛花期进行喷雾接种，着重对大豆茎秆及花进行接种。孢子浓度为1.0×103个/mL。接种应选在傍晚或阴雨天进行，接种后对试验区进行微喷灌，保持土壤湿润。

5.4病情调查

5.4.1调查时间

田间菌核接种区于8月20日左右调查供试材料发