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细胞穿膜肽对肿瘤细胞作用的研究进展

摘要：细胞穿膜肽是具有较强细胞膜穿透能力的小分子短肽,可携带多种大分子物质进入细胞进行靶向作用。本文综述了作为纳米载体的CPPs的分类及跨膜机制,以及近年其在抗肿瘤靶向治疗中的研究进展。脂质体（liposome，LP）是一种人工制备的球形磷脂双分子层囊泡，由于生物体质膜的基本结构也是磷脂双分子层膜，与生物体细胞相似的结构，因此有较好的生物相容性，脂质体作为药物的有效载体已经得到广泛应用，近年来其封装荧光染料进行肿瘤方面的示踪研究也有所报道。随着表面修饰材料及制备方法的不断发展，脂质体作为一种运输载体将更具明显优势，目前研究热衷以长循环和靶向脂质体封装药物和荧光染料的研究。本文将主要讨论长循环和靶向脂质体在肿瘤研究的应用和进展。

关键词：细胞穿膜肽脂质体靶向肝癌细胞

前言：由于细胞膜的天然屏障作用，遗传物质本身不能穿过细胞屏障，因此需要基因递送载体。最广泛使用的基因递送载体之一是病毒载体，其长期以来被用于其高效率[3]。然而，它们的高成本，免疫原性和难以生产导致了对非病毒替代品的研究。许多生物大分子都很难进入细胞发挥作用，为克服这一障碍，采用人工手段促进生物大分子跨越细胞膜，如电穿孔、显微注射、重组质粒等等。虽然这些方法应用比较广泛，但存在很多的局限性，如细胞毒性大、转入效率低等。在肿瘤治疗过程中，常规的化疗、放疗药物没有选择性，不可避免地损伤人体正常细胞。因此，开发针对肿瘤细胞的靶向载体可大大提高肿瘤的治疗效果而不损伤正常细胞。1998年，报道称人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）转录激活因子能单独进入细胞。此后，CPPS很快被用于药物靶向和导入的研究，发现其可以有效地将亲水性蛋白质和多肽、核苷酸、小分子药物等导入细胞，开辟了介导药物进入细胞的新途径。

细胞穿膜肽的分类

CPPs大致可以分为3类。是一大类由10～30个氨基酸组成的短肽，一个重要的特点是可以携带多种不同大小和性质的生物活性物质进入细胞，包括小分子化合物、染料、多肽、多肽核酸、蛋白质、质粒DNA、siRNA、200nm的脂质体、噬菌体颗粒和超顺磁性粒子等。到目前为止,已发现了多种CPPs,。大多数已知的CPPs不具备明显的组织特异性或细胞类型特异性,而是依赖于生理pH环境下氨基酸(主要是富含精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸残基)的正电荷序列和细胞表面带负电荷的糖蛋白之间的静电相互作用而发挥作用。用于细胞培养测定的CPP/pDNA纳米颗粒通过将质粒DNA（每孔0.5μg，24孔板）与CPP混合，在MQ水中以CPP/pDNA电荷比3（CR3）混合，最终体积为105μL，随后在室温下孵育40分钟。pGL3Control（Promega，Stockholm，Sweden）用作荧光素酶编码质粒，因为它最适合体外使用。在生理pH条件下精氨酸的胍头基可以和细胞表面膜上带负电的磷酸基和硫酸基产生氢键结合,进而产生细胞内化作用。赖氨酸与精氨酸含有相同的净正电荷,但不含有胍头基,当其单独作用时穿过质膜的效果会差些。Lindgren和Langel[4]发现肽序列中氨基酸的数量和次序(主要是精氨酸)决定着CPPs的转导性。因此,根据它们在序列、疏水性和极性等方面的特征。

2.不同穿膜方式细胞穿膜肽特征分析

细胞穿透肽（CPP）能够在细胞内运输亲水性分子。不同的细胞穿膜肽跨膜机制不同，一个细胞穿膜肽的具体机制有赖于多个参数。为了到达胞质溶胶，与货物相关的肽必须穿过血浆或内质膜[2]。已经提出了不同的肽内化到细胞中的分子机制，并且随着肽序列、结构和靶膜的不同，细胞内化机制也不同。对CPPs的穿膜机制目前尚存在争议，早期研究认为CPPs通过两种主要穿膜方式进入细胞内，即直接转运和内吞方式．以胞吞转运方式输运分子的CPPs中具有二级结构的残基2759个，C类二级结构占64.37%、H类占33.09%、E类占2.54%．从数据上看，直接转运的CPPs中C类、H类二级结构百分比相近，而胞吞转运输运分子的CPPs以C类二级结构为主，H类次之．可见，CPPs在不同细胞穿膜方式的二级结构特征具有一定程度区别．

3.CPPS在癌症诊断中的应用

分子成像工具的最新进展已经产生了许多用于设计智能探针的方法，例如用于成像和诊断程序的放射性标记的小分子，单克隆抗体和抗体片段。虽然已经取得了一些成果，但这些探针的使用在临床上并不有效，主要是由于它们的特异性低和目标渗透性不足[10]。由于高结合亲和力，特异性摄取，体内高稳定性，肽已逐渐用作成像探针，从非特定目标快速清除，并保留在目标中。最近，已经开发了选定数量的CPP以靶向一系列生物标志物和疾病相关