诊断学第四篇 实验诊断 第十章 其他检测.pptxVIP

第十章;;重点难点;染色体检测;一、染色体检查、染色体命名和书写方法;2.染色体命名

根据人类细胞遗传学命名的国际体制（ISCN），人类46条染色体按其长短和着丝粒的位置编为A～G7组，包括1～22号及X和Y染色体。男性为46，XY；女性为46，XX

根据各染色体上显带特点，将染色体划区分布，p表示短臂，q表示长臂。“2P35”则表示2号染色体短臂3区5带;3.核型分析及其书写

核型书写有统一格式，其书写顺序为：染色体数目、性染色体、染色体异常。

t表示易位：inｖ表示倒位，iso或i表示等臂染色体，ins表示插入，del表示缺失，r表示环状染色体。“-”表示丢失，“+”表示增加等，第一括号内是累及染色体的号数，第二括号内是累及染色体的区带，其中p表示短臂，q表示长臂。;二、染色体异常及染色体病;病名;基因诊断;一、基因诊断的含义;内容;二、基因诊断在诊断学中的地位;三、基因诊断的常用技术;方法;（二）DNA测序

1.DNA测序：测定DNA一级结构

2.临床意义

（1）DNA测序能直观地反映出DNA序列的变化

（2）是诊断未知突变基因的最直接的方法

（3）在遗传病和肿瘤的诊断、法医学的鉴定中具有非常重要的意义;方法;（三）聚合酶链反应

1.聚合酶链反应（PCR）是利用DNA聚合酶（如：TaqDNA）在体外催化一对引物间的特异DNA片断合成的基因体外扩增技术。反应特异性强，灵敏度高。

2.临床意义

（1）病原体DNA的检测、肿瘤微量残留细胞的检出、遗传病的基因诊断，法医学上嫌疑人或个体遗传物质的鉴定等。

（2）应用RT-PCR还可对RNA病毒如丙型肝炎病毒和待检基因的表达量进行检测。;（四）连接酶链反应

1.连接酶链反应（LCR）是一种新的DNA体外扩增和检测技术，主要用于点突变的研究及靶基因的扩增。

2.临床意义LCR法可以进行单碱基遗传病多态性的快速筛选、单碱基遗传病的产前诊断、微生物亚种和亚型的鉴别、多态性的分析、法医学中个体DNA的准确鉴别。

;（五）单链构象多态性分析

1.单链构象多态性（SSCP）分析是一种分析突变基因的方法。

2.临床意义SCP多与PCR技术联用（PCR-SSCP）检测基因突变，提高了基因突变检测的灵敏性，现已广泛用于遗传病及肿瘤基因的??析。

;（六）限制性片段长度多态性分析

1.限制性片段长度多态性（RFLP）分析是限制性内切酶、核酸电泳、印迹技术、探针－杂交技术的综合应用。

2.临床意义

（1）广泛地应用于遗传病的连锁分析，

（2）还可用于基因组同源性分析以及个体识别。

;（七）单核苷酸多态性（SNP）分析;（八）基因芯片技术

【原理】

将大量已知的寡核苷酸分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量

基因芯片技术集成了探针固相原位合成技术、照相平板印刷技术、高分子合成技术、精密控制技术和激光共聚焦显微技术，使基因芯片具有微型化、集约化和标准化的特点，实现了对靶基因的快速检测;应用;四、基因诊断在临床医学中的应用;四、基因诊断在临床医学中的应用;（三）肿瘤的基因诊断

1.癌基因：指能参与或直接导致细胞发生恶性转化的基因。

（1）肿瘤非特异性癌基因如H-ras、K-ras、c-myc等基因。

（2）瘤特异性癌基因如c属于非特异性癌基因；c-sis与淋巴结肿瘤转移有关，c-abl与慢性髓系白血病有关。

2.原癌基因：指存在于正常细胞内，在一定的因素刺激下可转变为癌基因的基因序列。

3.抑癌基因：是一类抑制细胞过度生长、增殖从而遏制肿瘤形成的基因。抑癌基因的丢失或失活可能导致肿瘤发生。;（四）药物代谢基因诊断

1.临床药物疗效与参与药物代谢的相关基因有密切关联。

2.肿瘤抗药性研究显示肿瘤化疗的失败在很大程度上是由于肿瘤细胞对化疗药物产生了耐药，如药物吸收减少、细胞解毒作用增强、靶分子改变、DNA损伤修复能力增强、细胞内药物溢出增多、细胞凋亡的抑制等。

;（五）基因诊断在法医学中的应用

1983年Jeffreys等在人体基因组DNA中发现了高度可变的小卫星区域，同一个体不同组织来源的DNA被同一酶降解后的Southern印迹图上的条带完全一样，而不同个体之间（除非同卵双生）的谱带都不相同，就像人的指纹具有高度个体特异性一样，因此这种Southern印迹图被称为DNA指纹。法医学常将此种技术用于刑事案件中的物证来源进行鉴定和民事案件中的亲子鉴定。

;流式细胞术及其临床应用;一、流式细胞术;二、流式细胞仪组成及其工作原理;二、流式细胞仪组成及其工作原理;三、流式细胞术的临床应用;

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;床旁检测;一、P