2025秋《三维设计 新课标高考总复习 生物》课件第2讲 重点研究“基因工程操作中限制酶的选择和PCR技术”.pptx

基因工程操作中目的基因的获取和基因表达载体的构建都离不开限制性内切核酸酶，只有选取合适的限制酶才能准确切取目的基因，因此限制酶的选取是基因工程操作的重点也是难点，近年来较难的高考试题大都围绕限制酶的选取进行考查。PCR技术既可以用于获取目的基因，又可以用于目的基因的检测与鉴定，是基因工程中重要技术之一，其应用较强，因此对PCR技术的考查也成为命题的热点。;1.(2024·山东高考)制备荧光标记的DNA探针时,需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大肠杆菌DNA聚合酶、扩增缓冲液、H2O和4种脱氧核苷酸(dCTP、dTTP、dGTP和碱基被荧光标记的dATP)的反应管①~④中,分别加入如表所示的适量单链DNA。已知形成的双链DNA区遵循碱基互补配对原则,且在本实验的温度条件下不能产生小于9个连续碱基对的双链DNA区。能得到带有荧光标记的DNA探针的反应管有 ();A.①② B.②③ C.①④ D.③④;解析:分析反应管①~④中分别加入的适量单链DNA可知,①中两条单链DNA分子之间具有互补的序列(10个连续碱基对),但双链DNA区之外的3端无模板,因此无法进行DNA合成,不能得到带有荧光标记的DNA探针;②中单链DNA分子内具有互补的序列,由于在本实验的温度条件下不能产生小于9个连续碱基对的双链DNA区,故该条单链DNA分子不发生自身环化,但两条链可以形成双链DNA区,由于DNA合成的序列(5?TCT?3)中不含碱基A,不能得到带有荧光标记的DNA探针;③中两条单链DNA分子之间具有互补的序列(10个连续碱基对),且双链DNA区之外的5端有凸出的碱基(含碱基T),因此进行DNA合成能得到带有荧光标记的DNA探针;④中单链DNA分子内具有自身互补的序列,结合题中信息知该条单链DNA分子不发生自身环化,两条链可以形成双链DNA区,且双链DNA区之外的5端有凸出的碱基(含碱基T),因此进行DNA合成能得到带有荧光标记的DNA探针。综上,能得到带有荧光标记的DNA探针的反应管有③④,故选D。

答案：D;2.(2024·湖南高考改编)最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中,分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸(ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP),子链延伸时,双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则。以加入ddATP的体系为例:若配???的为ddATP,延伸终止;若配对的为原脱氧核苷三磷酸(dATP),继续延伸;PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列,结果如图所示。下列叙述不正确的是 ()

;A.上述PCR反应体系中只加入一种引物

B.电泳时产物的片段越小,迁移速率越慢

C.5?CTACCCGTGAT?3为对照个体的一段序列

D.患者该段序列中某位点的碱基C突变为T

解析:利用双脱氧测序法时,PCR反应体系中加入的模板是待测的单链DNA,故只需加入一种引物,A正确。电泳时,产物的片段越大,迁移速率越慢,B错误。依据题干信息中双脱氧测序法的原理,可以确定每个泳道中条带(DNA片段)的3终端的碱基,如+ddATP的泳道中出现的条带(DNA片段)的3终端碱基就是A。另外由于每个片段的起始点相同,但终止点不同,可以通过比较片段的长度来确定DNA序列中每个位置上的碱基;图示电泳方向为从上→下,即对应的DNA片段为长→短,则对应的DNA测序结果为3→5,如对照个体的电泳结果最短的条带为+ddCTP泳道组的条带,则说明该DNA片段5端第一个碱基为C。因此对照个体的测序结果为5?CTACCCGTGAT?3,患者的测序结果为5?CTACCTGTGAT?3,C正确。对比患者和对照个体的测序结果可知,患者该段序列中某位点的碱基C突变为T,D正确。

答案：B

;3.(2024·山东高考)研究发现基因L能够通过脱落酸信号途径调控大豆的逆境响应。利用基因工程技术编辑基因L,可培育耐盐碱大豆品系。在载体上的限制酶BsaⅠ切点处插入大豆基因L的向导DNA序列,将载体导入大豆细胞后,其转录产物可引导核酸酶特异性结合基因组上的目标序列并发挥作用。载体信息、目标基因L部分序列及相关结果等如图所示。;(1)用PCR技术从大豆基因组DNA中扩增目标基因L时,所用的引物越短,引物特异性越(填“高”或“低”)。限制酶在切开DNA双链时,形成的单链突出末端为黏性末端,若用BsaⅠ酶切大豆基因组DNA,理论上可产生的黏性末端最多有种。载体信息如图甲所示,经BsaⅠ酶切后,载体上保留的黏性末端序列应为5??3和5??3。?

(2)重组载体通过农杆菌导入大豆细胞,使用抗生素筛选到具有该抗生素抗性的植株①~④。为了鉴定基因编辑是否成功,以上述抗性植株的DNA为模板,通过PCR扩增目标基因L,