第07讲重组DNA技术的基本工具-【寒假自学课】高二生物寒假课（人教版选择性必修3）（原卷版）.pdfVIP

第07讲重组DNA技术的基本工具

喇目标】

1.阐明重组DNA技术所需的三种工具的作用。

2.提升对基因工程的理能力，能够合理分析在基因水平产生的问题。

3.了进行DNA的粗提取和鉴定的原理，进行DNA的粗提取和鉴定的操作。

3.认同基因工程的作用及意义，认识到生物技术的发展离不开理论研究和技术创新。

立g【基础知识】

一程的概念

项目具体内容

操作对象基因

原理基因重组

操作环境体外

操作水平分子水平

结果获得人们需要的新的生物类型和生物产品

优点克服远缘杂交不亲和的障碍;定向改造生物的性状

二、限制性核酸内切酶

(1)来源：主要从原核生物中分离出来。

(2)种类：约4000种

(3)作川:识别双链DNA分子的某种特定核甘酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核甘酸之间的磷

酸二酯键断开。

4（）限制酶识别序列的长度最常见的为6个核甘酸，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个、或其他数

量的核苜酸组成。

①在中轴线两侧切割，形成黏性末端。如：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，为6个核甘酸，并在G和

A之间切开。

②在中轴线处切割，形成平末端。如：Smal限制酶能识另UCCCGGG序歹U，为6个核甘酸，并在G和C之

间切开。

中柏线

在中轴线处切割，形平木城限制的从识别序列的中心轴线处切开

时，切开的DNA两条小链的切II,是

平整的，这样的切口叫的切口・

总结归纳

1.限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核昔酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核甘酸之

间的磷酸二酯键进行切割的•类幅，简称限制酶。

2.限制作用实际就是限制酶降外源DNA,维护宿主遗传稳定的保护机制。一般不切割自身的DNA分子，

是由于甲基化的修饰作用，可使腺噪吟人和胞喀凭C甲基化而受到保护，通过甲基化作用达到识别自身遗

传物质和外来遗传物质的H的。

3.根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子;限制性内切酶可分为两大类，即I类酶和II类酶。

其中，H类酶有EcoRI、BamHkHindII、HindHI等，在所识别的特定碱基序列上有特定的酶切位点,因

而DNA分子经过H类能作用后，可产生特异性的能解片断，这些片断可用凝胶电泳法进行分离鉴别。

4.限制能识别DNA序列中的回文序列。回文序列指的是双链DNA或RNA分子中的特定的核苛酸片段，该

片段在其中一条链上按S到3,读取的序列与其互补链上按相同的5,到3,读取的序列一致。例如，DNA序列

ACCTAGGT之所以是回文序列，是因为它的互补序列是TGGATCCA,而反向互补序列是ACCTAGGT,和

其原来序列一致。有些限制酶的切割位点在回文的一侧（如EccRIBamHLHind等），因而可形成粘性

末端；另一些II类酶如AhiIBsuRLBalkHalIlkHPaLSmal等，切割位点在回文序列中间,形成平

末端。

三DNA连接酶

1（）作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制能切开的两个核甘酸之间的磷酸二酯键。即把脱氧核糖

和磷酸交替连接而构成的DNA骨架上的缺口连接起来。

（