聚焦关键能力,优化高考复习——以高中生物学“PCR引物”试题.docx

聚焦关键能力,优化高考复习——以高中生物学“PCR引物”试题归类分析为例

覃宝雄潘冬

(柳州高级中学广西柳州545006)

PCR技术应用广泛,近年各省市的高考题与模拟题出现了大量以“PCR引物”为背景的试题,不仅考查PCR实验本身,还深入到通过PCR技术解决基因工程操作中遇到的实际问题,如给目的基因加上限制酶识别序列或制备融合基因等。但高中生物学教材对引物的概念、利用引物的必要性、如何设计或选择引物、如何利用引物初步判断扩增的DNA是目的片段、引物与退火温度的关系等问题描述较少。下面通过对历年高考试题、模拟试题进行归类与分析,巩固基础知识,培养学生关键能力,为教师教学提供参考。

【例1】(2017·江苏)设计引物时需要避免引物之间形成________,而造成引物自连。

参考答案:碱基互补配对

分析:DNA聚合酶只能延长已存在的DNA片段。体内DNA的复制先由引发酶在DNA模板上合成一段RNA链,接着由DNA聚合酶从RNA引物3端合成DNA子链。体外扩增DNA需要在PCR体系中加入DNA引物。单条引物内或两条引物间不应含有4bp以上的互补序列。

教学建议:教师可以通过试题提醒学生,引物的设计除了满足碱基互补配对这一基本要求外,还要考虑其他方面的限制因素,如引物之间的互补、引物序列与退火温度等。

【例2】(原创)图1为X蛋白的部分基因序列,所示序列为引物结合的部分,据图分析:

图1X蛋白的部分基因序列

扩增X蛋白基因所需的引物序列是________________________;________________________。

参考答案:5-ATGCCGTAAGTCCTAC-3;5-TGATCTACGGCTTACA-3

分析:DNA子链的合成不能从无到有进行,DNA聚合酶只能催化脱氧核糖核苷酸加到DNA子链的3端上。分析模板链的5端及3端,结合DNA双链反向平行的特点,推测引物的延伸方向。书写引物序列,一般从引物的5端向3端书写,避免误判。图中位于上方的模板链5端磷酸基团在左,3端羟基在右侧,可知与上方模板链配对的引物5端在右侧,3端在左侧,引物序列为“5-TGATCTACGGCTTACA-3”。同理推测另外一条引物的序列。

教学建议:教师可以通过试题提醒学生熟练掌握DNA5端与3端的表现形式,引导学生结合DNA反向平行的特点解题。

一个DNA分子n次扩增得到DNA分子2n个,DNA单链2n+1条,需消耗引物的数量为2n+1-2,每种引物需要的条数是(2n+1-2)/2,即2n-1。如图2所示,教师可引导学生分析引物与DNA分子中间片段结合的情况,当第三轮PCR循环结束时出现两条单链等长的目的片段。该情境可延伸出另外两种情况:(1)若一条引物从DNA分子端部结合,另一条引物从DNA分子中间部位结合,则第二轮PCR循环结束时出现两条单链等长的目的片段;(2)若两条引物均从DNA分子端部结合,则第一轮PCR循环结束时出现两条单链等长的目的片段。

图2引物与DNA分子中间片段结合时的情况

【例3】(原创)已知引物1及引物2之间的序列为目的序列,若引物与DNA的结合位点如图3所示,在第________轮循环产物中开始出现两条单链等长的目的片段。

图3引物与DNA的结合位点图

参考答案:2

分析:题中的引物1不在DNA片段的端点,第1轮循环后,得到的两个DNA分子中有一个DNA分子两条单链等长并长于目的片段,另一个DNA分子两条脱氧核苷酸链不等长。通过绘图可推知,在第二轮循环产物中出现两条脱氧核苷酸链等长的目的片段。

教学建议:教师可以通过试题提醒学生做题不能死记硬背,应该结合图形具体问题具体分析。

【例4】(2022·北京杨镇第一中学模拟)若单菌落扩增后的DNA样品电泳结果如图4,则图5中对应泳道1和泳道2的引物组合分别为_________。(填序号)

图4单菌落扩增后的DNA样品电泳结果图

图5引物图

参考答案:引物3和引物4;引物1和引物2

分析:为判断PCR扩增所得DNA是否为目的片段,可用标准品(Marker)与PCR产物同时电泳,用染料对DNA进行染色后再用仪器检测PCR产物及标准品位置。通过对比PCR产物与标准品相对位置,推断实验扩增目的片段是否成功。泳道1和泳道2的条带分别为541bp和1076bp,因此,应选择两对方向相反的引物,其中引物3和引物4扩增的碱基对长度是473+68=541bp,引物1和引物2扩增的碱基对长度是(2073-473-590)+66=1076bp,故对应泳道1和泳道2的引物组合分别为引物3和4、引物1和2。

教学建议:部分学校