药物分离技术双语在线开放化学工程87课件.pptx

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药物分离技术DrugSeparationTechnology

化学工程学院

6.5

凝胶过滤柱层析介绍

01

凝胶层析概念

02

凝胶层析原理

Vt：柱床“总容积”；

Vo：即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙

之间的水相容积；

Vi：即凝胶颗粒内部所含水相的容积；

Vg：凝胶本身的容积；

Vt＝Vo十Vi十Vg或Vt-Vo=Vi十Vg

03

凝胶体积

三种不同分子量物质的混合样品用某种规格的凝胶柱进行分离。

样品加入，以水或其他溶液进行洗脱，即得洗脱曲线。

04

凝胶分离过程

（1）最先流出物质Ⅰ，Ⅰ分子量最大，完全不能进入颗粒内部，只能从颗粒间隙流过，“全排阻”。其洗脱体积最小，等于外水体积V0。

（2）最后流出物质Ⅲ，它分子量最小，其分子可以自由进入凝胶颗粒，“全渗入”。洗脱体积是外水体积与内水体积之和V0+Vi

（3）物质Ⅱ分子量介于渗入限与排阻限之间，其分子能够部分地进入凝胶颗粒中。“部分排阻”或“部分渗入”。洗脱体积Ve=V0+KdVi

五、

05

凝胶分配系数

当Kd=1时，洗脱体积Ve=V0+Vi，为全渗入。

当Kd=0时，洗脱体积Ve=V0，为全排阻。

当0Kd1时，洗脱体积Ve=V0+KdVi，为部分渗入。

06

凝胶过滤柱层析过程

1.脱盐

07

凝胶层析的应用

2.去热源

3.浓缩

蛋白质通过凝胶柱的速度即洗脱体积与其分子量有关:

LogM=k1-k2Ve

（Ve为洗脱体积）

先测得几种标准蛋白质的Ve，并以其分子量对数对Ve作图得一直线，再测出待测样品的Ve，查标准曲线即可确定分子量。

LogM

A

B

C

LogM测

Ve测

4.测定分子量

葡聚糖凝胶及离子交换树脂柱层析纯化制备单组分胰岛素工艺流程：

结晶胰岛素粗品—→水溶解—→Sephadex-G50纯化—→QAE-SephadexA-25纯化—→收集液浓缩—→透析脱盐—→冷冻干燥—→结晶—→单组分胰岛素

5.纯化

Sephadex-G50纯化胰岛素，除去胰岛素中前胰岛素和其它大分子抗原物质。

胰岛素凝胶柱层析装置

2.在凝胶层析柱中分离某有效成分时，洗脱体积为140ml,其外水体积和

总体积分别为60和200ml，求分配系数是多少？（凝胶体积忽略）

08

思考题

1.在凝胶过滤（分级范围是5000~400000）中，下列哪种蛋白质最先

被洗脱下来（）

A．细胞色素C（13370）

B．肌球蛋白（400000）

C．过氧化氢酶（247500）

D．血清清蛋白（68500）

B

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