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基于科学事实的PCR科学史重构

颜廷喜郭枫方刘露程可昕陈明林

（安徽师范大学安徽省重要生物资源与利用重点实验室安徽芜湖241000）

《普通高中生物课程标准（实验稿）》在教学建议中提出“注重生物科学史的学习”，《普通高中生物学课程标准（2017年版2020年修订）》（以下简称《新课标》）中再次提到“注重生物科学史和生物本质的学习”。高中生物学课程不仅要求学生掌握基础的生物学知识和基本的生物学能力，还要让学生领悟科学家在研究过程中的思路和方法。学习生物学科学史能让学生沿着科学家前进的脚步，理解科学的本质和科学研究的思路和方法，促进生物学学科核心素养的形成。因此，教师要充分挖掘生物学科学史，对科学史资料进行恰当的选择和组织，这对中学生物学教学具有重要意义。

科学事实是通过观察和实验所获得的经验事实，是经过科学整理和鉴定的确定事件。一个科学事实往往是先通过观察，然后通过推断，接着经过一系列的验证和应用才被人所承认。科学事实具有重复性、精确性、可靠性等特征。科学事实是科学认识形成的基础，学生要形成对生物学的正确认识，就要掌握正确的科学事实。

《新课标》颁布后，高中生物学教材也进行了一轮革新，教材内容进行了一些调整，增添了生物科技进展、生物科学史话、科技探索之路、科学家的故事等栏目，介绍了生物学的最新进展以及生物科学的发展历程。

《新课标》对生物技术与工程模块提出几个大概念，其中包括“基因工程赋予生物新的遗传特性”，并提出开展以下教学活动：①DNA的提取和鉴定；②利用聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。

聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）是根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分和反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。目前，我国不同版本高中生物学教材对PCR发明时间表述不一（表1）。下面通过比较中美现有的几种高中生物学教材，结合国内外对PCR反应的相关文献资料、采访、自传等，探索PCR发明历程，确定其发明时间。

表1不同生物学教材中对PCR发明时间的描述

目前，生物学教材中对PCR发明时间的描述主要是1983年和1985年。那么，PCR技术到底是哪一年发明的呢？

为准确把握PCR发明的时间历程，依据穆里斯发表的《聚合酶链反应的不寻常起源》《心灵裸舞》和保罗·拉比诺发表的《PCR传奇：一个生物技术的故事》等有关资料，对PCR的发明历程进行梳理。

穆里斯的自传《心灵裸舞》中描述到，1983年4月的一个周五晚上，穆里斯在128公路开车的过程中构思出PCR的概念。接着，穆里斯在Cetus图书馆进行相关文献检索，又询问公司内外的科学家和技术人员，但没人听说过这种技术。1983年8月，穆里斯首次在Cetus公司会议上提出PCR的概念。那时，仅有几个人感兴趣。

1983年9月到12月，穆里斯开始一系列的实验。1983年9月8日，穆里斯进行第一次PCR实验，以人类生长因子基因作为扩增目标，分离出一段长约400bp的片段，采用11bp和13bp长的寡核苷酸引物以及聚合酶商用缓冲液，将它们放在一个试管里进行加热、冷却、再加热，第一次实验并没有成功。在10月份进行的第二次PCR实验中，穆里斯利用相同的试剂和程序，进行加热溶液、冷却和添加酶的5或10个循环，第二次实验还是没有成功。

接下来，穆里斯继续深入地探索。穆里斯和助手法鲁纳选择一个较小的目标，采用细菌质粒并尝试更小反应体积和更集中的反应。实验结果表明在凝胶中确实有东西被扩增，但不能明确说明扩增了多少。穆里斯认为他和法鲁纳建立了成功的PCR反应。

虽然穆里斯已经积累一定的实验数据，但仍没有明确的证据证明PCR实验取得成功。

直到1984年10月底，日裔研究员才木全职从事PCR工作。1984年11月15日，才木等人的实验证明有适当大小的产物被扩增，但结果仍然不能令人信服。他们需要更明确的数据来证明特异性。

1984年冬～1985年春，才木等人进行扩增β-珠蛋白的实验，团队成员用可靠和可量化的数据证明，他们可以将目的基因组DNA扩增数十万倍，实验结果通过放射性定量特定序列的数量和使用寡聚体限制分析来确定。

1985年，Cetus公司计划在10月下旬召开的美国人类遗传学会议上介绍PCR在人类遗传病中的应用。Cetus公司要求穆里斯根据pBR322质粒的实验数据撰写一篇关于PCR理论概念的文章；另一篇关于β-珠蛋白PCR扩增的应用性文章在理论性论文后提交。但穆里斯坚决反对公司计划，他主张将PCR作为一个商业秘密，不发表任何文章。

1985年9月20日，才木等人如期提交了PCR应用性的文章《酶促扩增β-珠蛋白基因组序列和限制性位点分析用于诊断镰状细胞性贫血》（Enzym