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三点附着学说第91页，共135页，星期日，2025年，2月5日E+SP+EES能量水平反应过程?G?E1?E2酶（E）与底物（S）结合生成不稳定的中间物（ES），再分解成产物（P）并释放出酶，使反应沿一个低活化能的途径进行，降低反应所需活化能，所以能加快反应速度。E+SE-S???P+E1.酶促反应4.4.4酶的催化作用机制第92页，共135页，星期日，2025年，2月5日(1)酸－碱催化酸-碱催化可分为狭义的酸-碱催化和广义的酸-碱催化。酶参与的酸-碱催化反应一般都是广义的酸－碱催化方式。广义酸－碱催化是指通过质子酸提供部分质子,或是通过质子碱接受部分质子的作用，达到降低反应活化能的过程。4.4.4酶的催化作用机制2.酶催化反应机制类型第93页，共135页，星期日，2025年，2月5日His是酶的酸碱催化作用中最活泼的一个催化功能团。第94页，共135页，星期日，2025年，2月5日(2)共价催化催化剂通过与底物形成反应活性很高的共价过渡产物，使反应活化能降低，从而提高反应速度的过程，称为共价催化。酶中参与共价催化的基团主要包括His的咪唑基，Cys的巯基，Asp的羧基，Ser的羟基等。某些辅酶，如焦磷酸硫胺素和磷酸吡哆醛等也可以参与共价催化作用。第95页，共135页，星期日，2025年，2月5日米氏常数的测定基本原则：将米氏方程变化成相当于y=ax+b的直线方程，再用作图法求出Km。例：双倒数作图法（Lineweaver-Burk法）米氏方程的双倒数形式：1Km11—=——.—+——vVmax[S]Vmax第59页，共135页，星期日，2025年，2月5日1/Vmax斜率=Km/Vmax-1/Km1Km11—=——.—+——vVmax[S]Vmax第60页，共135页，星期日，2025年，2月5日酶的Km在实际应用中的意义Km是酶的特征性常数，只与酶的性质，酶所催化的底物和反应条件(温度、pH、有无抑制剂等)有关，与酶的浓度无关。各种酶的Km值大致在10-1～10-6M之间。Km值可以近似表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低;Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。第61页，共135页，星期日，2025年，2月5日1、酶浓度对酶反应速度的影响在有足够底物和其他条件不变的情况下，反应速度与酶浓度成正比。当[S][E]时，V=K2×[E]4.3.2影响酶促反应速率的其它因素第62页，共135页，星期日，2025年，2月5日2、温度对酶反应速度的影响一方面是温度升高,酶促反应速度加快。另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。因此大多数酶都有一个最适温度。在最适温度条件下,反应速度最大。第63页，共135页，星期日，2025年，2月5日最适温度不是一个固定的常数，它随底物的种类、浓度、溶液的离子强度、pH、反应时间等的影响。一般:反应时间短，最适温度高。反应时间长，最适温度低。第64页，共135页，星期日，2025年，2月5日3、pH对酶反应速度的影响(1)．酶反应的最适pH（optimumpH）第65页，共135页，星期日，2025年，2月5日第66页，共135页，星期日，2025年，2月5日酶的最适pH也不是一个固定的常数，它受到底物的种类、浓度;缓冲液的种类、浓度;酶的纯度;反应的温度、时间等的影响。例:碱性磷酸酶催化磷酸苯酯水解时[S]为2.5x10-5M，最适pH为8.3[S]为2.5x10-2M，最适pH为10.0第67页，共135页，星期日，2025年，2月5日(2)．pH影响反应速度的原因(1)pH影响了酶分子、底