植物基因克隆的工具酶.pptVIP

粘性末端（cohesiveend）切割方式大多数Ⅱ型限制性内切酶结合并切割的DNA序列是一种回文序列，经切割一端产生5′-磷酸突出的末端，另一端产生3′-OH突出的末端，即DNA片段双链的两个末端含有几个等长核苷酸碱基互补配对的单链末端，称为粘性末端。第30页，共71页，星期日，2025年，2月5日第31页，共71页，星期日，2025年，2月5日部分常用的限制性内切酶第32页，共71页，星期日，2025年，2月5日第33页，共71页，星期日，2025年，2月5日第34页，共71页，星期日，2025年，2月5日第35页，共71页，星期日，2025年，2月5日有一些限制酶的识别顺序不是对称结构５’－CCGCTC－３’３’－GGCGAG－５’AccBSIBssSI５’－CTCGTG－３’３’－GAGCAC－５’第36页，共71页，星期日，2025年，2月5日同裂酶（isoschizomers）概念用途有一些同裂酶对于切割位点上的甲基化碱基的敏感性有所差别，所以可以用来研究DNA甲基化作用。KpnIGGTACCAsp718GGTACCSstICCGCGGSacICCGCGG有一些来源不同的限制性酶识别的是相同的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。第37页，共71页，星期日，2025年，2月5日识别位点的序列相同同裂酶（Isoschizomers)①完全同裂酶（同序同切酶）识别位点和切点完全相同。如HindⅢ和HsuI。HindⅢ5’-A?AGCTT-3’3’-TTCGA?A-5’HsuI5’-A?AGCTT-3’3’-TTCGA?A-5’第38页，共71页，星期日，2025年，2月5日XmaI5’-C?CCGGG-3’3’-GGGCC?C-5’SmaI5’-CCC?GGG-3’3’-GGG?CCC-5’识别位点相同，但切点不同。如XmaI和SmaI。②不完全同裂酶（同序异切酶）：第39页，共71页，星期日，2025年，2月5日用途如：限制酶HpaⅡ和MspⅠ是一对同裂酶，共同的靶序列是CCGG。当其靶序列中含有一个5-甲基胞嘧啶（CCGG，*号表示甲基化的碱基），HpaⅡ不能够切割它，而MspⅠ对于这个核苷酸的甲基化作用的反应则是中性的，它不管C残基甲基化与否都能够切割。*现已研究发现，许多动物DNA中90%以上的甲基，都是在序列CG处以5-甲基胞嘧啶的形式出现。所以，通过比较HpaⅡ和MspⅠ的DNA消化产物就可以检测出甲基化的存在。第40页，共71页，星期日，2025年，2月5日同尾酶（isocaudamer）概念与同裂酶对应的一类限制性酶，它们虽然来源各异，识别的靶序列也各不相同，但都产生出相同的粘性末端，这类酶称为同尾酶。常用的限制酶BamHⅠ、BclⅠ、BglⅡ、Sau3AⅠ和XhoⅡ就是一组同尾酶，它们切割DNA后都形成由GATC4个核苷酸组成的粘性末端。举例第41页，共71页，星期日，2025年，2月5日识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。如BamHI、BglⅡ、BclI、XhoⅡ等5’-G?GATCC-3’3’-CCTAG?G-5’BamHIBclI5’-T?GATCA-3’3’-ACTAG?T-5’5’-A?GATCT-3’3’-TCTAG?A-5’BglⅡ5’-U?GATCY-3’3’-YCTAG?U-5’XhoⅡU代表嘌呤；Y代表嘧啶。第42页，共71页，星期日，2025年，2月5日用途由于同尾酶切割DNA后产生的是粘性末端，因此，可以通过粘性末端之间的互补作用而彼此连接起来，这在基因克隆实验中是很有用处的。同尾酶（isocaudamer）由一对同尾酶分别产生的粘性末端共价结合形成的位点，特称为杂种位点（hybridsite）第43页，共71页，星期日，2025年，2月5日5’-?GATC----3’3’----CTAG?-5’Sau3A同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点一般不能再被原来的酶识别。？5’-G3’-CCTAGGATCT-3’