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DB13

河北省地方标准

DB13/T1384.9—2011

饲料中伊维菌素的测定

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2011-05-10发布2011-05-20实施

河北省质量技术监督局发布

I

DB13/T1384.9—2011

前言

本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。

本标准由河北省质量技术监督局提出。

本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、河北医科大学、北京出入境检验检疫技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。

本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、卢晓宇、吕品、杨立学、李志平、贾茜、马春玲、米振杰、张敬轩、沈磊、高振同、武英利。

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饲料中伊维菌素的测定

1范围

本标准规定了饲料中伊维菌素的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于饲料中伊维菌素的测定。

本标准的方法检出限为10μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682－1992，neqISO3696:1987)

3原理

试样中的伊维菌素，采用丙酮-水提取。提取液经用异辛烷进行液-液分配使被测物进入异辛烷层。浓缩，用正己烷与乙腈浸出，并进行第二次液-液分配使被测物进入乙腈层。浓缩，加水，使成水溶液。水溶液再经Sep－Pak小柱净化，用乙腈洗脱。洗脱液经蒸干，甲醇浸出并定容，溶液经液相色谱-串联质谱定性定量检测。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1丙酮：经高锰酸钾回流lh，重蒸馏。

4.2乙腈：色谱纯。

4.3异辛烷：重蒸馏。

4.4正己烧：经氧化铝层析柱净化后，重蒸馏。

4.5甲醇：色谱纯。

4.6丙酮-水（1+1）。

4.7乙腈-水（1+1）。

4.8C18Se－Pak小柱，或相当者：使用前用水进行预处理。

4.9伊维菌素标准品：纯度≥97％。

4.10伊维菌素标准储备液：准确称取0.1g（准确至0.000lg）的伊维菌素标准品于100mL容量瓶中，用少量的甲醇溶解，然后再用甲醇稀释至刻度，混匀。配制成伊维菌素浓度为1.0mg/mL的标准储备液。

4.11伊维菌素标准工作液：根据需要，准确移取适量标准储备液，用甲醇稀释成适当浓度的标准工作液，标准工作液需每周配制一次。

4.12甲酸。

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4.130.1％甲酸水溶液：准确量取1mL甲酸至1000mL容量瓶中，用水定容，混匀即可。

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2电子天平：感量精确至0.01g。

5.3离心管：50mL。

5.4离心机。

5.5旋转蒸发器。

5.6超声波浴。

5.7旋涡混匀器。

6测定步骤

6.1提取

称取约5g（精确至0.0lg）试样于烧杯中，加入10mL丙酮-水（1+1），旋涡混匀2min。移至50mL离心管中，用20mL异辛烷洗涤烧杯，合并入离心管中。旋涡混匀1min，于5000r/min离心10min，取异辛烷层氮吹至2mL。

6.2净化

取上述浓缩液加入8mL正己烷和10mL乙腈，于超声波浴中超声振摇5min。移至50mL离心管中，于5000r/min离心5min。移乙腈层于50mL离心管中。再用10mL乙腈提取一次，离心5min，合并乙腈层。加入20mL水，于60℃旋转蒸发浓缩至约6mL，加入6mL水。

取上述溶液缓慢注入经预处理过的C18Sep－Pak小柱中，弃去流出液，减压干燥。用3×5mL乙腈洗脱，收集洗脱液于具塞刻度离心管中。氮气吹干，用1.0mL甲醇－乙腈－水溶液（9+9+2）溶解，待测。

6.3测定

6.3.1液相色谱-串联质谱条件

色谱柱：C18，5μm，150mm×4.6mm（内径）或相当者。

流动相：甲醇（A）+0.1%甲酸水溶液（B）。

流速：