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细胞生物学实验讲义

吴锦程梁杰编

莆田学院环境和生命科学系生物技术专业

2009年2月

目录

1.前

言

3

2.实验壹普通光学显微镜及暗视野显微镜的使用4

3.实验二荧光和相差显微镜及其使用16

4.实验三细胞膜的渗透

性2

3

5.实验四细胞凝集反

应

.27

6.实验五叶绿体的分离和荧光观

察29

7.实验六线粒体和液泡的超活染色和观

察32

8.实验七酸性磷酸酶的显示方法(选

做）36

9.实验八植物细胞原生质流动及其影响因素(选做）39

10.实验九植物细胞骨架的观察(选

做）41

前言

细胞生物学是当前生命科学中核心学科之壹，也是重要的专业基础

课，其理论和实验技术已广泛地用于研究细胞的形态结构、基因表达和

克隆、病毒、细菌、胚胎发育、远缘杂交、人类疾病的发病机制、药物

机理等领域，随着分子生物学的研究渗入，分子细胞生物学也得到了突

飞猛进的发展。目前许多综合大学、农业、医学及药科大学把细胞生物

学作为本科生和研究生的必修课或基础理论课，同时也开设了专门的细

胞生物学实验课，学生们通过实验，进壹步地加深了对理论课的理解，

也为今后的专业实验课和毕业论文实验奠定了基础。本讲义精心选择了

细胞生物学中的常规实验，作为教材面向本系生物技术专业本科生进行

讲授。

实验壹普通光学显微镜及暗视野显微镜的使用

壹、实验目的

1.强化普通光镜结构和使用技能的知识，掌握让其发挥最佳效能的方法。

2.了解暗场显微镜的构造和原理，且掌握它们使用方法。

二、实验用品

1.材料和标本：载玻片、盖玻片、牙签，香柏油、生物永久装片、擦镜纸、

洋葱。

2.器材：普通光学显微镜，暗视场显微镜。

三、实验内容和方法

（一）普通光学显微镜

1.显微镜的用途

显微镜是用来观察、记录和研究经过制片技术处理后被检物体细微结构

的最主要的光学精密仪器。400多年来，经不断改进，显微镜的结构和性能

逐步完善，形成了品种繁多、型号各异的光学显微镜系列它广泛地应用于各

学科领域中，对微观世界的探索及理论的研究起着极其重要的作用（如图

1-1）。最常用的是普通光学显微镜，此外仍有多种专用于不同显微术的显微

镜，它们是利用不同的光学原理在显微镜基本设计的基础上发展而来的，如

相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和倒置显微镜等具有特殊功能或用

途的光镜。形形色色的光学显微镜虽然外形和结构差异较大，但其基本构造

和工作原理是相似的。

图1-1光学显微镜型号实例

2.显微镜的壹些基本知识

普通光学显微镜的基本工作原理是利用物镜和目镜的多组凸透镜将物

像逐级放大且反射到视网膜上的过程。而显微镜的性能和质量的高低可通过

分辨率、数值孔径、总放大倍率等指标来反映。

(1)分辨率：衡量光学系统分辨相隔微小距离的俩个点能力的指标，即“能

够分辨俩点之间最小距离的能力”，称之为光学系统的分辨率。壹个光

学系统它所能分辨的俩点之间的距离愈小，分辨率也就越高。显微镜的

分辨率用公式表示为：d=0.61λ/NA式中d为最小分辨距离；λ为光线

的波长；NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值

和照明光源的波长俩个因素决定。NA值越大，照明光线波长越短，则

d值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即减小d值，可采取以下

措施:①降低波长λ值,使用短波长光源。②提高NA值。③消色差