液相色谱方法开发.pptVIP

一般流出问题早流出峰的分离度差.迟流出峰的峰宽增加而峰高降低.由于k’范围宽，所以分析时间长.强保留组分造成柱污染.等梯度洗脱-在洗脱样品的整个过程中，流动相的组成保持不变.第30页，共42页，星期日，2025年，2月5日AnalyticalEducationCenterH5929A11-09梯度洗脱-一个解决方案优点改善分离度提高检测性能能够分离复杂样品缩短分析时间降低由于强保留组分而使色谱柱性能变差的可能性其他应用柱清洗方法开发中的尝试运行梯度洗脱-在分离过程中改变流动相组成.第31页，共42页，星期日，2025年，2月5日梯度平衡时间的影响（一）10分钟的梯度，6分钟的平衡时间色谱图不重复第32页，共42页，星期日，2025年，2月5日梯度平衡时间的影响（二）平衡时间∶6分钟平衡时间∶7分钟平衡时间∶8分钟平衡时间∶9分钟平衡时间从6到7分钟，第一个峰的保留时间有明显的变化，说明6到7分钟的平衡时间不足，而8到9分钟变化不大因而大于这个时间时，平衡充足。第33页，共42页，星期日，2025年，2月5日高效液相经常使用粒径5um的色谱柱，用过一段时间后，柱压会略有升高，尤其是做中药。常用来洗色谱柱的溶剂为甲醇，当色谱柱用甲醇洗过之后，再用含乙腈的流动相平衡，会使柱压迅速升高，色谱柱渗漏，这是由于甲醇和乙腈汇合产生局部高压。因此，这种情况下，应慢慢升高流速，可以从0.6ml/min开始，一步步的平稳柱压，防止色谱柱漏液。第34页，共42页，星期日，2025年，2月5日ZJGSUZJGSUniversity液相色谱方法开发第1页，共42页，星期日，2025年，2月5日提纲：一.HPLC的应用二.方法开发过程1）选择HPLC检测器2）方法开发的具体步骤3）梯度洗脱方法第2页，共42页，星期日，2025年，2月5日一.HPLC的广泛应用据2008年统计，世界上化合物总数多达5000多万种在全部有机化合物中仅有20％左右的样品适用于GC分析而HPLC可对80％左右的有机化合物进行分离和分析第3页，共42页，星期日，2025年，2月5日HPLC的广泛应用HPLC特别适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物以及生物活性物质的分离和分析并且可以做制备在医药、食品、农业、生命科学、化工、环保等领域都有着广泛的应用潜力。第4页，共42页，星期日，2025年，2月5日HPLC的应用领域在食品研究中的分析应用食品中的天然成分碳水化合物类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇脂肪酸和有机酸蛋白、肽、氨基酸食品添加剂酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂抗氧化剂、防腐剂颜料和染料（色素〕维生素污染物霉菌（黄曲霉毒素〕农药残留和兽药残留多环芳烃（PAHS〕和亚硝酸第5页，共42页，星期日，2025年，2月5日HPLC的应用领域在医药研究中分析应用药物分析有USP、BP、CP等标准常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心血管药、磺胺类消炎药等。甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性激素和孕激素等。抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。中草药研究中的应用：生物碱、甙类(皂甙、强心甙、黄酮甙等)、萜类手性药物研究中的应用：光学异构体的拆分(如解毒剂D-青霉胺毒性小，L-异构体毒性很强)医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。在兽药研究中分析应用 第6页，共42页，星期日，2025年，2月5日HPLC的应用领域在生物化学和生物工程中的应用氨基酸、多肽合成和蛋白质的分析研究核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究生物胺的分析研究（儿茶酚胺类)在精细化工分析中的应用醇、醛和酮、醚的分离分析酸和酯的分离分析表面活性剂的分析聚合物的分析研究药物、农药、染料、炸药等工业产品第7页，共42页，星期日，2025年，2月5日HPLC的应用领域化妆品行业要控制和分析：防腐剂、防晒剂、性激素以及维生素等；在公安、刑警破案工作需要投毒药物、毒品分析等在环境污染分析中的应用废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、酚类和胺类的检测在无机离子分析中应用饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析第8页，共42页，星期日，2025年，2月5日第9页，共42页，星期日，2025年，2月5日第10页