T_CVMA 217-2025 棘球蚴（包虫）时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA217—2025

棘球蚴（包虫）时间分辨荧光免疫层析抗体

检测方法

TRFIAfordetectionofantibodiesagainsthydatidosisantibody

2025-2-14发布2025-2-14实施

中国兽医协会发布

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T/CVMA217—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国动物疫病预防控制中心提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：中国动物疫病预防控制中心、青海省动物疫病预防控制中心、河南科技大学、新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心、洛阳现代生物技术研究院有限公司、西藏自治区动物疫病预防控制中心、甘肃省动物疫病预防控制中心、洛阳莱普生信息科技有限公司。

本文件主要起草人：孙雨、阚威、李玉婉、李静、宋晓晖、宁立宏、林元清、李长印、马晓艳、游潇倩、都占林、吴兵、马艳萍、马占军、齐海涛、陈帆、原小燕、巨金铃、刘蓉菁、谢得军、杨俊鹏、曾战豪、曹丽萍、刘慧芳、央珍、卓玛央吉。

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T/CVMA217—2025

棘球蚴（包虫）时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法

1范围

本文件规定了棘球蚴（包虫）时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法的试剂与耗材、技术原理、实验前准备、操作步骤、结果计算、试验成立条件及结果判定等内容。

本文件适用于检测牛、羊血清中的棘球蚴（包虫）抗体。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

时间分辨荧光免疫层析技术Timeresolvedfluorescenceimmunochromatographicassay；TRFIA

以时间分辨荧光微球作为示踪物，将抗原抗体固定在硝酸纤维素膜上，通过层析来呈现免疫反应结果的一种新型免疫分析技术。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BCA：双缩脲试剂法蛋白含量测定（BicinchoninicAcidAssay）

IPTG：异丙基硫代半乳糖苷（IsopropylThiogalactoside）

SDS：十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SodiumDodecylSulfatePolyacrylamideGelElectrophoresis）

5技术原理

采用时间分辨荧光免疫层析技术和双抗原夹心法相结合的技术与原理。通过样品与荧光微球标记物沿层析膜移动，样品棘球蚴Eg95抗体与荧光微球标记物、检测线（T线）上的抗原结合而产生荧光信号值（T值），荧光微球标记物继续移动与质控线（C线）上的抗体结合产品荧光信号值（C值），计算出T/C值即为棘球蚴抗体检测值。

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T/CVMA217—2025

6试剂与耗材

6.1棘球蚴（包虫）抗体荧光微球检测试纸，见附录A。

6.2相关试剂配制，按照附录B配制。

6.3微量毛细采样管（10μL）。

6.4微量移液器（量程：10μL、20μL、200μL）。

6.5便携式免疫荧光分析仪及配套ID卡，能在荧光检测波段365/610nm条件下检测，按照附录C操作。

6.6注射器（5mL、10mL）。

7样品的采集及处理

7.1样品采集

按照NY/T541中规定进行样品的采集与处理，期间做好个人防护。按常规方法抽取2mL~3mL血液置洁净干燥的试管中，静置约60min，待血液凝固后4000r/min离心10min（也可将血液样品静置约120min，待血液凝固自然析出血清），分离血清。血清清亮，无溶血、无污染。

7.2血清样品的保存与运输

按照NY/T541中规定进行血清样品的存放与运输。血清样本若在一周内检测，置2℃~8℃条件下保存。若长时间保存，应置于-20℃以下冷冻保存，且应避免反复冻融。

8操作步骤

8.1样品稀释

将微量毛细采样管取10μL全血或血清样本加入到样本稀释液中混匀，稀释后的样品应在1h内完成检测。可按照