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核酸的染色DNA染色法除了EB染色最常用外，还有以下几种方法。甲基绿：一般将0.25%甲基绿溶于0.2mol/LpH4.1的乙酯缓冲液中，用氯仿抽提至无紫色，将含DNA的凝胶浸入，室温下染色1h即可显色，此法适用于检测天然DNA。Feulgen染色：用此法染色前，应将凝胶用1mol/LHCl固定，然后用Schiff试剂在室温下染色，这是组织化学中鉴定DNA的方法。第94页，共170页，星期日，2025年，2月5日第二节光学检测技术基于物质光化学性质而建立起来的分析方法称之为光化学分析法。分为:光谱分析法和非光谱分析法。光谱光度分析技术是利用化学物质具有的发射光、吸收光或散射光的光谱特征来分析其性质、结构和含量的方法，也叫分光光度技术。光的互补：蓝??黄第95页，共170页，星期日，2025年，2月5日一、紫外—可见光分光光度技术利用化学物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱，对物质作定性、定量和结构分析的方法。物质的颜色来自物质对光的选择性吸收。各种不同的物资都具有其各自的吸收光谱。第96页，共170页，星期日，2025年，2月5日当某单色光通过均匀溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度、入射光强度及溶液的厚度成正比，描述其关系的方程就是比色原理——郎伯-比耳定律。T=I/I0，A=-lgT=-lgI/I0=lgI0/I。入射光强度为I0，透射光强度为I，T为透光度。透光度的负对数称为吸光度。A=KLCA为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液层厚度，称为光径；C为溶液浓度。第97页，共170页，星期日，2025年，2月5日二、分光光度计的结构原理最常用的是可见分光光度计和紫外-可见光分光光度计光源单色器样品吸收池检测器信号指示系统五大部份结构：第98页，共170页，星期日，2025年，2月5日（一）光源光源定义：指一种可以发射出供溶液或吸收物质选择性吸收的光。光源应在一定光谱区域内发射出连续光谱，并有足够的强度和良好的稳定性，在整个光谱区域内光的强度不应随波长有明显的变化。光源种类：可见光分光光度计常用光源是钨灯或卤钨灯。紫外光光度计常用氢灯作为光源。第99页，共170页，星期日，2025年，2月5日（二）单色器定义：将来自光源的复合光分散为单色光的装置称为分光系统或单色器。种类：滤光片棱镜光栅第100页，共170页，星期日，2025年，2月5日（三）比色杯又称为吸收池或比色皿材料：常用无色透明、耐腐蚀和耐酸碱的玻璃或石英材料做成（五）信号指示系统（四）检测器检测器是将透过溶液的光信号转换为电信号，并将电信号放大的装置。常用的检测器为光电管和光电倍增管。是将光电管或光电倍增管放大的电流通过仪表显示出来的装置。第101页，共170页，星期日，2025年，2月5日三、分光光度计的操作方法（一）分光光度计的基本操作以721-A型分光光度计为例，其基本的操作步骤为：1.开721-A分光光度计的开关，将比色池的盖子打开，通电20分钟使仪器预热。2.将波长旋至测定的波长。3.将空白液、校准液或待测液放入比色池，将空白液置于光路中。4.将开关置于T位，打开比色池盖子，用光量粗调和光量细调调节T为0.0,关上比色池盖子，调节T为100.0。5.将开关置于A，用消光调零调节A为0.06.重复步骤4和57.将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸光度（A）第102页，共170页，星期日，2025年，2月5日721-A分光光度计第103页，共170页，星期日，2025年，2月5日（二）分光光度技术的定量方法1.标准曲线法根据Lambert-Beer定律，液体的浓度在一定范围内与吸光度成正比关系。配制一系列浓度的标准品溶液（浓度应包含高、中、低浓度范围），按标本处理方法作相同处理，在特定波长下测定吸光度，以标准液浓度为横座标，以吸光度为纵座标，按最小二乘法的原理，将对应各点连成一条通过原点的直线，这条直线称为标准曲线。待测溶液测定吸光度后，从标准曲线上可查出其相应的浓度。方法：第104页，共170页，星期日，2025年，2月5日制作和应用标准曲线时应注意下面几点：（1）测定条件发生变化时（如更换标准品和试剂等），应重新绘制。（2）标准品应有高的纯度，标准液的配制应准确。（3）当待测液吸光度超过线性范围时，应将标本稀释后再测定。（4）标本测定的条件应和标准曲线制作时的条件完全一致。第105页，共170页，星期日，202