基因操作技术王贵霞27课件.pptVIP

*菌*主讲教师：王贵霞基因操作技术任务一诱导工程菌的表达在教师的指导下能够诱导大肠杆菌中外源基因在表达。能够提取分离表达产物。掌握IPTG诱导表达的原理，操作步骤和注意事项。?外源基因表达的宿主菌外源基因在原核生物中高效表达，除了有适合的载体，还必须有适合的宿主菌，以及一定的诱导因素。宿主菌的选择对外源基因的表达是至关重要的，因为外源基因特别是真核基因在细菌中的表达往往不够稳定，常常被细菌中的蛋白酶降解，因此有必要对细菌菌株进行改造，使其蛋白酶的合成受阻，从而使表达的蛋白得到保护。实验中常用的宿主菌有，JM109，和BL21等大肠杆菌菌株。

外源基因表达的调控通常表达质粒不应使外源基因始终处于转录和翻译之中，因为某些有价值的外源蛋白可能对宿主细胞是有毒的，外源蛋白的过量表达，必将影响细菌的生长，为此宿主细胞的生长和外源基因的表达是分成两个阶段进行。第一阶段使含有外源基因的宿主细胞迅速生长，以获得足够量的细胞，第二阶段是启动调节开关，是所有细胞的外源基因同时高效表达，产生大量有价值的蛋白表达产物。在原核基因表达调控中，阻遏蛋白与操纵基因系统起着重要的开关调节作用。当阻遏蛋白与操纵基因结合时，阻止基因的转录。加入诱导物，使其与阻遏蛋白结合，解除阻遏，从而启动基因转录。

异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)根据表达载体的不同，外源基因表达常采用