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自身抗体检测的一致性与质量控制的挑战及改进策略

摘要

自身抗体免疫检测对于自身免疫病的辅助诊断、疾病分层分级和预后判断具有重要意义。目前很多重要的自身抗体已被纳入自身免疫病分类诊断标准中。然而，由于自身抗体检测不同方法学之间存在可比性差的问题，自身抗体检测结果的判读可能出现显著差异，这也为自身抗体检测的临床应用带来巨大挑战。本文旨在探讨影响自身抗体检测结果可比性的主要因素，包括自身抗体的异质性、抗原的差异性、定性检测阳性判断值的设定，以及定量检测的校准品量值溯源等。此外，本文还将讨论室间质量评价在提升自身抗体检测结果可比性方面的作用。

自身免疫病（autoimmunedisease，AID）是由于机体免疫系统功能异常引起的以免疫耐受性丧失、自身抗体产生致组织损伤和器官功能障碍的一类疾病。AID具有高患病率、高致残致死率以及高经济负担的特点。英国的一项大型队列研究显示，AID影响11.0%的人口，据此推算，我国约有超过1亿AID患者［1］。

AID具有高度异质性和非特异性临床表现，其诊断很大程度依赖于自身抗体检测结果。自身抗体检测不仅用于诊断，还用于AID的分层分型、病情监测和预后评估。而随着越来越多的自身抗体被纳入AID的诊断和/或分类标准中，临床实验室能否提供准确、一致的自身抗体检测结果变得至关重要。因此无论在哪个实验室、采用何种检测方法和试剂，都应确保检测结果具有“可比性”和“一致性”，否则可能会影响临床治疗决策，甚至造成误诊或漏诊［2,3］。

自身抗体本身的高异质性，以及不同抗原表位、亲和性和同型的差异是导致检测结果缺乏可比性的重要因素。此外，缺乏统一的参考测量程序和标准物质，以及自身抗体检测方法多样和本身不同厂家试剂的差异，也可导致同一份样本在不同检测方法或试剂中呈现不同的结果。除了上述因素，试剂质量、仪器设备和操作人员的熟练程度等因素也直接影响检测结果的可比性。因此，确保自身抗体检测结果的可比性和一致性一直是自身抗体检测领域的巨大挑战［2］。影响检测结果可比性和一致性的因素涵盖分析前、分析中、分析后的整个检测过程［4］。

一、影响自身抗体检测结果可比性的主要因素

（一）自身抗体本身的异质性的影响

自身抗体是机体免疫系统对自身抗原产生免疫应答时形成的多克隆抗体。由于AID相关的抗原成分复杂，包括蛋白质、多肽、脂类、核酸等，自身抗体通常是一组识别自身抗原上多个不同表位的免疫球蛋白。抗原来源和表位的多样性导致不同克隆的自身抗体具有不同的表位特异性和对于抗原的亲和力，从而使不同个体的抗体库具有独特性。此外，即使是同一个体，其自身抗体库也可能因表位扩散、治疗缓解等因素而发生变化［5］。例如，在对瓜氨酸肽产生自身免疫反应的类风湿关节炎（rheumatoidarthritis，RA）患者体内，自身抗体库可能识别不同蛋白质上的瓜氨酸化位点。这些自身抗体与瓜氨酸肽的结合力在不同个体中存在差异。值得注意的是，部分患者的抗瓜氨酸化蛋白抗体（anti-citrullinatedproteinantibodies，ACPA）与瓜氨酸肽的结合力较弱，这可能导致他们在使用某些检测试剂时不会出现阳性反应［6］。

（二）检测试剂与抗原的差异

自身抗体检测结果的差异与检测方法和试剂的选择密切相关。不同检测方法使用的试剂和抗原组分及来源可能存在差异，即使是同一种检测方法，不同品牌的试剂也可能导致检测结果有所差异。抗原的选择、纯度和稳定性都是影响检测结果一致性的关键因素。理想的检测试剂应该能够识别不同患者的自身抗体，并从抗体库中“筛选”出这些抗体。

自身抗体免疫学检测方法的核心在于抗原与抗体的相互作用。因此，用于“捕获”自身抗体的靶抗原是决定试剂性能的关键，尤其是敏感度和特异度。抗原需要具备足够的表位多样性以结合不同表位的自身抗体，同时保持高度的特异度，避免与无关抗体发生交叉反应。使用表位限制性抗原可能会降低检测敏感度，而混合抗原的使用则可能减少特异性［5］。由于不同试剂所用的抗原存在差异，它们与自身抗体的结合可能会产生不同的结果［7］。例如，同一患者样本在不同检测方法中的结果可能不一致，有时表现为强阳性，有时则为弱阳性甚至阴性。这种差异通常是由检测方法的敏感度、特异度和其他技术参数的差异造成的［5］。

靶抗原可以分为重组抗原和天然抗原，试剂盒的检测质量由靶抗原的真实性、再现性和纯度等关键特征决定［8］。例如，蛋白类抗原在分离、纯化和干燥过程中可能会降解，使其不能捕获临床样品中识别天然抗原的自身抗体。此外，人体中几乎所有的多肽和蛋白质都表现出一定程度的分子异质性，纯化方法可能仅选择了其中某些亚组分。天然蛋白和重组蛋白之间可能还存在糖基化差异。此外，抗原结合位点的固有变异性、多链的存在、免疫球蛋白亚类的存在和亲和力的变化都可能给自身抗体的检测结果带来