项目五发酵控制氮源的调控与消泡68课件.pptxVIP

;本次课主要内容:

氮源浓度的变化与控制

发酵过程泡沫的形成与控制

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大肠杆菌中以GInB（pII蛋白）为中心C/N调控示意图

;发酵常用氮源（利用的先后、速度）

快速利用（快速氮源）：铵盐、氨基酸

缓慢利用（慢速氮源）：

蛋白质——分解成氨基酸

硝酸盐——还原成铵;发酵过程中氮的变化和影响

和碳源利用相同，微生物先利用容易利用的氮源再利用缓慢利用的氮源。

氮源的代谢规律：随着菌体生长，氮源被利用，氨基氮和氨氮都下降，到中期下降缓慢，并有一段时间维持在一定水平，氮利用于产物合成（含氮的产物特别要注意）到发酵后期，由于菌体衰老自溶，放出氨基氮，使氨基氮上升。;螺旋霉素产生菌的氮代谢

;不同氮源对产物合成的影响：

;氨基氮水平（小分子）

例如：链霉素发酵

一般要求：

前期：NH2-N120(mg/100ml)

中期：NH2-N90～95

后期：NH2-N80～85;氮源的补加：

补氮的目的：

补充氮源（C/N）

控制氨基氮的水平

控制发酵过程pH

pHpH0(NH4)2SO4,NH4Cl

pHpH0氨水、硝酸钠、尿素;有机氮源：

例：土霉素发酵前期补2~3次酵母粉，放罐单位比对照高1500u/ml。

青霉素发酵47小时开始加尿素，每6小时补加一次，结合补加乳糖，发酵单位可从30000提高到40000u/ml以上。

赤霉素生产补加的氮源是花生粉，配16%的花生粉液体，当菌生长到粘度大于15秒时，说明氮源被消耗很多，就开始补加花生粉。

对于含氮的产物的生产特别需要补氮。;实例谷氨酸发酵流加氮源：

在谷氨酸生产中，前12小时为菌体生长阶段，由于菌体生长快，氨被利用，使pH下降，这时要及时流加尿素，供给菌体生长所需的氮源并调节pH。生产阶段菌生长停止，尿素被尿酶分解为氨pH上升，氨被利用来合成谷氨酸，使pH下降，再次流加尿素。;无机氮源：

通氨

通氨是某些抗生素提高产量的有效措施，它的作用是补充无机氮源和调节pH。通氨一般使用压缩氨气或氨水（20%），采用少量间歇添加或自动流加，由空气管道流入与发酵液均匀混合。氨浓度控制通过测定氨的比消???速率，菌的比生长速率，产物比合成速率，pH值来控制补加速率。

;补硫酸铵

例：林可霉素原来基础培养基中（NH4)2SO4为0.6%，18小时后减少到7mg/100ml，发酵后期缺少氮源。

改进工艺：将基础培养基中（NH4)2SO4减少为0.5%，14.6小时开始补加30%（NH4)2SO4溶液，根据培养液的pH和NH2-N浓度控制补加量。正常情况下NH2-N保持在10mg/100ml以下，平均补加（NH4)2SO41.5%，提高了发酵单位。

;补氮的依据：

一般补碳源时氮源也应适当补加

例：基因工程菌的β-羟基丁酸酯（PHB）发酵

发酵前期和中期：还原糖10-40g/l

(NH4)2SO41-2g/l

C/N10-20

发酵后期：还原糖5-10g/l

(NH4)2SO40.5g/l

C/N10-20

;谷氨酸棒杆菌发酵尿素补加：

由于谷氨酸棒杆菌的尿酶活力相对较弱，所以开始可以多加一点，补料间隔也少一点。一般总量为3%左右，开始取1-1.5%。

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基因工程毕赤酵母50小时趋势曲线图

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泡沫：是气体在液体中的粗分散体，属于气液非均相体系。

连续相：液体分散相：气体;泡沫的危害：

发酵过程中存在一定数量的泡沫是正常现象，有利于氧的传递；但过多的持久性泡沫对发酵造成不利的影响。

降低生产能力：

在发酵罐中，为了容纳泡沫，防止溢出而降低装量。

装料系数=料液体积/发酵罐容积。

引起原料/产物浪费：

如果设备容积不能留有容纳泡沫的余地，气泡会引起原料/产物流失，造成浪费。

增加了菌群的非均一性。

引起染菌。

消泡剂的加入给后续产

物提取带来了麻烦。;泡沫形成的原因：

气液接触

含助泡剂（一般认为蛋白质）

起泡速度大于破泡速度

发酵过程影响起泡的因素：

与通气量、搅拌的强烈程度有关

通气大、搅拌强烈可使泡沫增多

应先开小通气量，再逐步加大。搅拌转速也如此。

;培养基配比与原料组成：

培养基营养丰富，黏度大，产生泡沫多而持久。

蛋白质是主要的起泡因素。

发泡