第二节动物细胞工程技术.pptVIP

3、动物细胞融合技术的应用意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。主要用途：利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。第31页，共56页，星期日，2025年，2月5日二）：动物细胞融合的成功应用

——单克隆抗体的制备第32页，共56页，星期日，2025年，2月5日人们获得抗体的传统方法是什么?将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体这种方法的缺点是什么?效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？-B淋巴细胞在体外不能无限增殖。思考第33页，共56页，星期日，2025年，2月5日单克隆抗体的制备—极富创造性的方案将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。第34页，共56页，星期日，2025年，2月5日杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体第35页，共56页，星期日，2025年，2月5日问题：1）、本过程利用了哪些原理？①免疫原理；②细胞融合原理和动物细胞培养原理2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？同种生物的细胞没有免疫排斥反应；融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质。（不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体）第36页，共56页，星期日，2025年，2月5日3）、为何要进行两次筛选？4）、如何进行第2次筛选？培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。问题：第37页，共56页，星期日，2025年，2月5日?动物特异性免疫?分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）?细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）?第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）?第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。?选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。?提取单克隆抗体。1、单抗的制备过程要点：第38页，共56页，星期日，2025年，2月5日1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点.2、用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗。生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向—准确找到癌细胞位置；药物—原位杀死癌细胞。）2、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，可大量制备。3、单克隆抗体的应用第39页，共56页，星期日，2025年，2月5日三）、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、定义：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.3、分类：胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易。动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难2、原理：动物细胞核具有全能性第40页，共56页，星期日，2025年，2月5日第1页，共56页，星期日，2025年，2月5日思考与回忆：1、动物细胞全能性特点？随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。3、动物的细胞培养的理论依据（原理）？