荧光分光光度法与检测技术.pptVIP

第二节荧光定量分析多组分混合物测定与吸光度一样，荧光强度也有加和性，因此混合物不需经过分离，可用解联立方程的方法测定。可选择两物质不同的激发波长处的荧光强度测定，也可选择不同荧光波长处的荧光强度测定，这样选择范围比紫外-可见分光光度法广泛。*第31页，共43页，星期日，2025年，2月5日分析化学（第2版）谢庆娟李维斌全国高职高专药品类专业卫生部“十二五”规划教材荧光分光光度法与检测技术*第1页，共43页，星期日，2025年，2月5日◆学习目的通过学习荧光分析法的基本原理，产生荧光的条件以及荧光光谱特征和用途，加深对荧光分析的依据、条件和应用的理解，并能选择荧光物质的激发波长和荧光波长进行分析。为学习药物分析、天然药物化学等专业课程奠定基础。*第2页，共43页，星期日，2025年，2月5日◆知识要求熟悉掌握荧光和磷光产生的原理和特点及区别；激发光谱与荧光光谱的概念及用途；溶液荧光光谱的特征；产生荧光的条件；荧光定量分析的依据、条件和方法。了解。了解影响荧光强度的因素，荧光分析仪器及其与紫外-可见分光光度计的区别，荧光分析新技术在分析中的应用。*第3页，共43页，星期日，2025年，2月5日◆能力要求掌握荧光分光光度计的基本结构及仪器的基本操作方法，学会使用荧光分光光度计对药物进行分析的操作技术。*第4页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节荧光分光光度法的基本原理某些物质吸收紫外-可见光后，可以发射其波长比吸收光更长的光，并且随照射光的消失而消失，这种发射光称为荧光（fluorescence）。荧光分析法（fluorometry）是利用某些物质发射荧光的特性进行定性、定量分析的光学分析方法，又称荧光光谱法*第5页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理一、荧光的产生过程（一）单重态与三重态A单重基态B激发单重态C激发三重态*第6页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理（二）荧光的产生电子由激发单重态→基态单重态的跃迁*第7页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理（二）磷光的产生电子由激发三重态→基态单重态的跃迁课堂互动您能比较荧光和磷光的主要区别吗？*第8页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理二、激发光谱和荧光光谱（发射光谱）*第9页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理任何荧光物质都具有两个特征光谱：激发光谱和荧光光谱（发射光谱）激发光谱是当荧光波长一定时，荧光强度随激发光波长而变化的关系曲线（以激发光波长λex为横坐标，荧光的发光强度F为纵坐标的光谱）。*第10页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理荧光光谱是当使激发光波长和强度不变，而让物质所产生的荧光通过发射分光系统(II)分光，测定每一发射波长荧光强度F，以发射光波长λem为横坐标，荧光的发光强度F为纵坐标作图所得的关系曲线。*第11页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理溶液荧光光谱具有如下特征：斯托克斯位移荧光光谱的形状与激发波长无关荧光光谱与激发光谱的镜像关系蒽的激发光谱（虚）和荧光光谱（实）*第12页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理三、荧光与分子结构（一）荧光物质的特征具有强的可见-紫外吸收，即具有K带强吸收具有高的荧光效率荧光效率*第13页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理（二）分子结构与荧光的关系大的共轭π键结构λex（激发）λem（激发）φF苯2052780.11萘2863210.29蒽3654000.46四苯3904800.60*第14页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理分子的刚性和共平面性取代基的影响联苯φF=0.18芴F=1.0*第15页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理（三）影响荧光强度的外界因素温度溶剂溶液酸碱性荧光熄灭剂散射光激发光源*第16页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理（四）荧光分光光度计荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。*第17页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节基本原理（一）仪器类型滤光片荧