3.2 基因工程的基本操作程序 第1课时（34页）.pptxVIP

第2节基因工程的基本操作程序第1课时

能辨析启动子和起始密码子、终止子和终止密码子。01能概述目的基因的筛选与获取方法方法。02能阐明PCR技术的原理、过程。03

苏云金杆菌培育转基因抗虫棉需要哪几步？Bt基因表达苏云金伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白）摄食害虫死亡

苏云金杆菌与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入Bt基因重组DNA分子培育转基因抗虫棉的简要过程

?基因工程的基本操作程序目的基因的筛选与获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用。载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。前提核心关键保证

在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因。目的基因“杀虫基因”:Bt抗虫蛋白基因根据不同的需要，目的基因是不同的，主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。一、筛选合适的目的基因1.目的基因概念注意：不是所有的基因都编码蛋白质或肽链。

（2）实例：Bt抗虫蛋白基因（Bt基因）的筛选过程用苏云金杆菌制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害对Bt基因的表达产物Bt抗虫蛋白有了较为深入的了解苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关掌握了Bt基因的序列信息Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因（1）较为有效的方法：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。功能清晰已知结构3.筛选合适的目的基因（3）认识基因结构和功能的技术方法测序技术→序列数据库（如GenBank）→序列对比工具（如BLAST）

获取目的基因的常用方法有哪些?从基因文库中寻找聚合酶链式反应（PCR）扩增化学合成法目的基因的核苷酸序列未知目的基因的核苷酸序列已知初始目的基因的来源1.从生物中直接获取2.人工合成注意：要保持基因的完整性二、获取目的基因的方法

DNA合成仪1.人工合成目的基因①前提：②方法：目的基因比较小、核苷酸全部序列已知DNA合成仪→直接合成目的基因

Q3：化学合成法（能/不能）合成自然界不存在的新基因，使生物产生新的性状以满足人类的要求。不含；参与翻译的mRNA序列是由编码序列转录而来。Q1：化学法合成的目的基因（含/不含）内含子、启动子和终止子？多种；遗传密码具有简并性或一种氨基酸可能由多个密码子决定。Q2：若是控制同一种蛋白质合成的目的基因，利用化学合成法合成的基因可能有（一种/多种），理由是？能

（主要指cDNA文库）基因文库基因组文库部分基因文库2.从基因文库中获取目的基因基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。基因组文库：含有某种生物全部基因片段的重组DNA的克隆群体。部分基因文库：含有某种生物部分基因片段的重组DNA的克隆群体，如cDNA文库。

提取某种生物的全部DNA基因组所有基因将每个基因与载体连接，导入不同受体菌中储存用适当的限制酶切割基因组文库构建基因组文库中的基因含启动子、终止子和内含子！①基因组文库的构建

某种生物（某一发育时期）的（成熟的）单链mRNA与mRNA互补的单链DNA双链cDNA片段导入不同受体菌中储存与载体连接cDNA文库逆转录酶DNA聚合酶构建②部分基因文库（如cNDA文库）的构建注意：cDNA文库中的基因不含启动子、终止子和内含子。

PCR扩增仪PCR技术由穆里斯等人于1985年发明，于1993年获得诺贝尔化学奖。3.利用PCR获取和扩增目的基因

（1）PCR：是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。全称：聚合酶链式反应。原理：DNA半保留复制。操作环境：体外（PCR扩增仪/PCR仪）。目的：对目的基因的核苷酸序列进行大量复制。优点：可以在短时间内大量扩增目的基因。PCR扩增仪

复习：DNA在细胞内复制所需要的条件条件名称模板双链DNA分子原料4种脱氧核苷酸能量ATP酶DNA解旋酶DNA聚合酶PCR的原理——体外DNA复制PCR所需要的条件条件名称模板双链DNA分子原料4种脱氧核苷酸能量加热酶DNA聚合酶引物2种?热稳定的

（2）PCR技术所需的基本条件通过控制温度使DNA复制在体外反复进行PCR扩增仪参与的组分在DNA复制中的作用模板：2条DNA母链提供DNA复制的模板原料：dNTP(4种脱氧核苷酸)合成DNA子