精细化学品性能测试 课程 - -1752705603881.pptVIP

最后一种色谱分离模式是体积排阻色谱法，又称凝胶色谱，条件排阻色谱或空间排阻色谱法，主要用于较大分子的分离。与其他液相色谱方法原理不同，它是一种非作用力色谱，不具有吸附分配和离子交换作用机理，而是基于试样分子的尺寸大小和形状不同来实现分离的，是筛分原理。尺寸排阻色谱的固定相为化学惰性的多孔物质，如凝胶，凝胶是指含有大量液体，一般为水，柔软的而富有弹性的物质，它是经过交联而具有立体网状结构的多聚体，如交联葡聚糖凝胶和交联琼脂糖凝胶等，凝胶为具有一定大小的空穴，类似于分子筛，小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰较慢，中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过，而大分子被排斥在外出峰最快。溶剂分子小故在最后出峰。因此尺寸排阻色谱法是按照分子大小顺序进行分离的，*最后一种色谱分离模式是体积排阻色谱法，又称凝胶色谱，条件排阻色谱或空间排阻色谱法，主要用于较大分子的分离。与其他液相色谱方法原理不同，它是一种非作用力色谱，不具有吸附分配和离子交换作用机理，而是基于试样分子的尺寸大小和形状不同来实现分离的，是筛分原理。尺寸排阻色谱的固定相为化学惰性的多孔物质，如凝胶，凝胶是指含有大量液体，一般为水，柔软的而富有弹性的物质，它是经过交联而具有立体网状结构的多聚体，如交联葡聚糖凝胶和交联琼脂糖凝胶等，凝胶为具有一定大小的空穴，类似于分子筛，小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰较慢，中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过，而大分子被排斥在外出峰最快。溶剂分子小故在最后出峰。因此尺寸排阻色谱法是按照分子大小顺序进行分离的，*在尺寸排阻色谱分离中，试样相对分子质量与洗脱体积的关系如图所示，称为相对分子质量校正曲线，上图为各类有关聚合物的流出曲线，下图中表示洗脱体积和聚合物分子大小之间的关系，A点表示比A点相应的分子质量大的分子均被排斥在所有的凝胶空穴之外，称为排阻极限。分子量大于排阻极限的这些物质，将不被保留直接流出色谱柱，如色谱峰1，它的洗脱体积为V0，V0为柱中凝胶颗粒之间的体积。另外凝胶还有一个全渗透极限点B，凡比B点对应的分子质量小的分子，都可以完全深入凝胶空穴中，也都可以以相同的保留体积流出，如色谱峰4。只有相对分子量介于A和B两个极限之间的组分才有可能分离。它们按照相对分子质量降低的次序先后洗脱。A与B间的线性部分称为选择渗透范围。尺寸排阻色谱可用于分离相对分子质量大的分子，如蛋白质、核酸等，也可用于测定合成高聚物的分子质量的分布，研究聚合机理等。*同学，你好！到此为止我们已对液相色谱的各种分离类型及其分离机理等相关内容进行了了解，下面我们对其进行一个小结。我们重点介绍了高效液相色谱法几种分离模式的分离原理及其应用。HPLC按其组分在两相间分离机理的不同主要分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法、化学键合相色谱法、离子交换色谱法和尺寸排阻色谱法等。*

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职业教育精细化工技术专业教学资源库（2019-51）高效液相色谱法概述1主要内容☆第一部分亲合色谱法原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。亲合色谱法原理：先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂（环氧、联胺等），再连接上配基（酶、抗原等）。亲合色谱法亲合色谱法配体酶底物抗体抗原凝集素多糖，糖蛋白核酸互补碱基序列激素受体谷胱甘肽谷胱甘肽-s-转移酶或GST融合蛋白亲合色谱法配体体积排阻色谱原理按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。相对分子质量在100～105范围内的化合物按质量分离。体积排阻色谱体积排阻色谱固定相凝胶(具有一定大小孔隙分布)；插入动画，参考视频HPLC分类及原理体积排阻色谱小结ThankYou!下面我们介绍亲和色谱法。亲和色谱法是专门为分离生物大分子而设计的色谱分离技术。它是利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离的一种方法。亲和色谱的固定相包括三部分，基质、空间臂和配基。通常是在基质表面先键合一种具有一般反应性能的所谓间隔臂，如环氧、联胺等，然后再连接上配基，如酶、抗原等。基质的作用是固定配基，为化学惰性和物理惰性，间隔臂的作用是通过克服任何空间位阻效应，提高配体与目标分子的结合。*下面我们介绍亲和色谱法。亲和色谱法是专门为分离生物大分子而设计的色谱分离技术。它是利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离的一种方法。亲和色谱的固定相包括三部分，基质、空间臂和配基。通常是在基质表面先键合一种具有一般反应性能的所谓间隔臂，如环