情境2柠檬酸的发酵生产任务3摇瓶种子制备65课件.pptVIP

LOGO情境2柠檬酸的发酵生产任务3：摇瓶种子制备任务描述为缩短发酵周期，工业上需把麸曲接入种子罐进行液体培养，使孢子萌发产生菌丝，然后作为种子液接入发酵罐进行发酵。在实验室小规模发酵中，通常把孢子接入摇瓶进行液体种子制备，然后再进入发酵罐发酵。此次任务中，我们把任务2中制备的孢子接入摇瓶液体培养基中进行液体种子制备。具体任务包括：淀粉液化→培养基配制→灭菌→接种→培养。任务目标知识目标：1、了解淀粉液化的概念及原理；2、了解液体种子的质量要求；能力目标：1、掌握淀粉液化的方法及摇瓶接种操作方法；素质目标：1、无菌意识2、质量意识任务实施【实施准备】1、实验主要仪器设备摇床、超净工作台、灭菌锅、水浴锅、500ml三角瓶若干、0.1429mol/LNaOH、1%酚酞试剂、pH计、稀碘液。2、材料菌种：黑曲霉培养基：黑曲霉种子培养基：20%玉米粉糖化液。【实施步骤】1、摇瓶发酵培养基的配置将玉米粉用100目筛子筛好备用，称取200g玉米粉于烧杯中，同时加入自来水800ml，即质量比自来水：玉米粉为4:1，混匀。2、培养基的糖化边加热边搅拌培养基，待加热到90℃后，加入高温淀粉水解酶0.5-1ml，加热搅拌恒温保持20～30min，防止糊化粘壁，用碘指示剂检验不变蓝，即液化完全。得到20%玉米水解液全液（含碳6.73%，氮1.26%）。3、分装、灭菌将糖化好的培养基装入2个摇瓶（锥形瓶）中，装入量为摇瓶总体积的1/10,6-8层纱布封口，121.3℃，灭菌15-20min。4、接种待糖化好的培养基温度降至40℃以下时，将活化的黑曲霉孢子（约为4-5片麸皮）接种入培养基中，在35℃，200r/min的摇床中20h左右。5、液体种子质量检查培养后的种子液应菌丝粗壮、短且分支少，瘤状，部分膨胀为优,菌丝结成像菊花状的小菌球体。菌球直径不超过100μm,每1ml种子液达1～2万个。无异味、无杂菌、无异常菌丝。pH2.0～2.5，酸度0.5%～2.0%，柠檬酸含量0.5g/dL左右。用显微镜检测菌球的生长状况，若菌丝细长则说明黑曲霉已经提前进入柠檬酸发酵时期，会导致后期的柠檬酸产量降低。（1）黑曲霉镜检方法一：直接取一滴发酵液于载玻片上，用盖玻片密封后镜检。方法二：镜检过程：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检（染料：草酸铵结晶紫液）。（2）pH的测定用pH计测种子液的pH。（3）酸度的测定精确吸取5ml的种子滤液于100ml锥形瓶中，加入少量的去离子水，加2-3滴0.1%酚酞指示剂，用0.1429mol/LNaOH溶液滴定，滴定微红色计算用去的NaOH毫升数，每消耗1mlNaOH即为1%的酸度。镜检菌丝形态?pH?酸度?【结果记录】1、生产上对液体种子液质量有何要求？LOGO