春第七章酶的非水相催化.pptVIP

2.酶在有机介质中的底物特异性与选择性2.1底物专一性酶具有区分两个结构相似的不同底物的能力，取决于底物疏水性能的差异。ie.胰凝乳蛋白酶在有机介质中，由于酶分子活性中心的结合部位与底物之间的结合状态发生某些变化，致使酶的底物特异性会发生改变。N-乙酰-L-丝氨酸乙酯N-乙酰-L-苯丙氨酸乙酯疏水作用

水、辛烷第27页，共73页，星期日，2025年，2月5日2.2对映体选择性对映体选择性：酶在对称的外消旋化合物中识别一种异构体的能力。也叫立体异构专一性。立体选择系数KLD：表示对映体选择性的大小Km：米氏常数Kcat：酶的转换数2.酶在有机介质中的底物特异性与选择性第28页，共73页，星期日，2025年，2月5日2.2对映体选择性立体选择系数越偏离1，酶催化的对映体选择性越强。酶在水溶液中催化的对映体选择性较强，而在疏水性强的有机介质中对映体选择性较差。所以，增加水含量能提高对映体选择性。第29页，共73页，星期日，2025年，2月5日2.2对映体选择性意义：手性药物的合成例如，某些蛋白酶在水溶液中对L-氨基酸起作用，而在有机介质中可用D-氨基酸为底物合成手性药物。第30页，共73页，星期日，2025年，2月5日2.3区域选择性

1，4-二丁酰基-2-辛基苯乙腈甲苯酶在有机介质中进行催化时，具有区域选择性（regioselectivity），即酶能够选择底物分子中某一区域的基团优先进行反应。第31页，共73页，星期日，2025年，2月5日2.4键选择性键选择性：同一个底物分子中有两种以上化学键可与酶反应，酶对其中一种优先反应。例：6-氨基-1-己醇的选择性酰基化6-氨基-1-己醇第32页，共73页，星期日，2025年，2月5日3.分子记忆对配体的记忆功能分子记忆根据分子识别理论，酶与配体的诱导、相互作用改变酶的构象，能够获得与配体类似物结合能力的酶，这种由配体诱导产生酶记忆的方法，称为分子记忆（molecularmemory)第33页，共73页，星期日，2025年，2月5日有机相生物印迹酶枯草杆菌蛋白酶溶液

含N-Ac-Tyr-NH2冻干除去抑制剂枯草杆菌蛋白酶枯草杆菌蛋白酶溶液

不含N-Ac-Tyr-NH2冻干枯草杆菌蛋白酶在辛烷中催化酯化反应的速度比较：反应（1）中得到的酶比反应（2）中得到的酶高100倍在水溶液中其活性：相同（1）（2）第34页，共73页，星期日，2025年，2月5日＋酶蛋白抑制剂冻干除去抑制剂有机溶剂水溶液枯草杆菌蛋白酶的分子记忆第35页，共73页，星期日，2025年，2月5日分子印迹技术原理：竞争性抑制剂诱导酶活性中心构象发生变化，形成一种高活性的构象形式，而此种构象形式在除去抑制剂后，因酶在有机介质中的高度刚性而得到保持。分子记忆:酶蛋白分子在有机相中具有对配体的“记忆”功能。第36页，共73页，星期日，2025年，2月5日4．pH记忆pH记忆：有机溶剂中的酶能够保持它冷冻干燥前或吸附到载体上之前所在缓冲液中的pH。因为酶在冻干或吸附到载体之前，先置于一定pH值的缓冲液中，缓冲液的pH值决定了酶分子活性中心基团的解离状态。酶在有机介质中催化的最适pH通常与在水溶液中催化的最适pH相同或接近第37页，共73页，星期日，2025年，2月5日八、有机介质中酶催化反应的影响因素及其控制1、酶的种类及浓度不是所有的酶都能在有机溶剂中催化反应的。已报道的酶类有：脂肪酶、蛋白酶、过氧化氢酶、醛缩酶、多酚氧化酶、醇脱氢酶ATP酶、细胞色素氧化酶、胆固醇氧化酶等。第38页，共73页，星期日，2025年，2月5日2.有机溶剂的选择有机溶剂的极性：疏水性参数lgPlgP↓，疏水性↓，极性↑；有机溶剂越容易抢夺结合水、破坏水化层lgP↑，极性↓；疏水性底物难溶于有机溶剂，反应难以进行一般选择2≤lgP≤5的有机溶剂第39页，共73页，星期日，2025年，2月5日3.水含量的控制最适水含量——通过实验确定水含量对PSL(假单胞菌脂肪酶)催化酯合成速率的影响：在最适含水量时酶催化反应的速率最大。第40页，共73页，星期日，2025年，2月5日4.温度的控制最适温度有机介质的最适温度高于水中的最适温度（水含量变小，热稳定增强）通过实验确定温度↑，立体选择性↓第41页，共73页，星期日，2025年，2月5日5.pH值的控制pH印记现象酶在冷冻干燥过程中，pH状态发生变化。因此，要加冷冻干