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基因3型猪戊型肝炎病毒的分子流行病学剖析与感染性克隆构建研究

一、引言

1.1研究背景与意义

戊型肝炎病毒（HepatitisEVirus，HEV）作为引发戊型肝炎的病原体，是一种单股正链无包膜RNA病毒，在病毒性肝炎的致病原中占据重要地位。戊型肝炎主要通过粪-口途径传播，具有流行和散发两种形式，流行多现于亚洲、非洲、美洲等发展中国家，通常因水源污染所致；散发则常见于欧美一些发达国家。自1955年印度因水源污染发生首次戊型肝炎大暴发后，尼泊尔、苏丹、苏联、吉尔吉斯斯坦等地以及中国的新疆、辽宁、吉林、内蒙古、山东等省均有戊型肝炎流行的记录，其中1986-1988年中国新疆南部地区的戊型肝炎大流行，发病119280例，死亡707例，危害极其严重。

戊型肝炎病毒不仅感染人，还可感染猪、野猪、鸡、鸟、鼠、猫及鹿等动物，是人畜共患病原，猪已成为常见的病毒储库。猪源HEV与人类戊型肝炎的关联密切，世界大部分学者研究证实人源HEV与猪源HEV病毒在基因水平上比较接近，猪源HEV还可实验性跨种间感染大猩猩和恒河猴等非人灵长类动物，日本等地也有多起因生食或半生食猪肉制品导致人员感染的病例。近年来，随着养猪业的规模化和集约化发展，猪戊型肝炎病毒的传播和流行情况愈发受到关注，其感染虽在猪群中可能表现出不明显的肝炎临床症状，但肝脏功能受损会对相关生产指标产生负面影响，给养殖业带来一定的经济损失。同时，戊型肝炎病毒对公共卫生的威胁也不容忽视，感染HEV每年在全球可造成约5万人死亡，器官移植者和免疫缺陷患者感染HEV后还能够发生持续性感染。国家卫健委发布的法定传染病疫情报告数据显示，自2012年以来，中国戊肝报告发病连续8年超过甲型肝炎，居急性病毒性肝炎之首，且戊肝的病死率比甲肝高10倍以上，特别是对老年人、孕妇以及慢性肝炎人群危害更大，如果在孕晚期感染戊肝病毒，孕妇的病死率可能达到10%-50%。

目前，国际病毒分类学委员会（ICTV）将HEV归为戊型肝炎病毒科戊型肝炎病毒属成员。HEV基因组全长约7.5kb，由5’和3’非结构区及3个开放阅读框（ORF）组成。依据基因序列的差异，HEV可分为多个基因型，1型与2型主要引发人的感染及大规模传播，3型与4型通常引发人畜共患的散发性病例。在中国，猪HEV的感染率较高，达70%，大多数属于基因4型，同时也存在基因3型，且在相同区域可能出现3型或4型两类基因型混合污染的情况。对猪戊型肝炎病毒进行分子流行病学分析，能够深入了解病毒在猪群中的分布、传播规律以及变异情况。通过采集不同来源的HEV样本，提取基因序列并进行生物信息学分析，可明确病毒的种类、主要污染源以及分子演化趋势；通过病例回顾性分析和横断面研究，获取感染率、感染程度、不同年龄段和性别的感染率等流行病学特征，有助于确定病毒的传播趋势和潜在传播路径，为制定科学有效的防控措施提供依据，从而降低猪群的感染率，减少经济损失，保障养猪业的健康发展，同时也能降低人类感染戊型肝炎病毒的风险，维护公共卫生安全。

构建基因3型猪戊型肝炎病毒感染性克隆具有多方面的重要意义。在病毒研究领域，感染性克隆是深入探究病毒生物学特性、复制机制、致病机理等的关键工具。通过构建基因3型猪HEV感染性克隆，能够在细胞水平和动物模型中对病毒的生命周期进行细致研究，揭示病毒与宿主细胞的相互作用机制，为理解戊型肝炎的发病过程提供理论基础。在疫苗开发方面，感染性克隆可作为疫苗研发的重要起始材料，通过对其进行改造和优化，有望开发出安全有效的基因工程疫苗。目前市场上虽在欧美等一些国家和地区已开发了HEV-3疫苗，但还没有疫苗可以商业化使用，构建感染性克隆并以此为基础进行疫苗研究，能够为疫苗的开发提供科学的基础支持，推动新型疫苗的研发进程，从而有效预防戊型肝炎病毒的感染，保障人类及动物健康。此外，感染性克隆还可用于抗病毒药物的筛选和评价，为开发针对戊型肝炎病毒的特效药物提供有力手段，对于控制戊型肝炎的传播和流行具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

在猪戊型肝炎病毒分子流行病学研究方面，国内外均取得了一定进展。国外研究较早关注到猪源HEV与人类戊型肝炎的关联，如Meng等学者于1997年就发现猪体内存在与人类戊型肝炎病毒密切相关的新型病毒，证实了猪作为HEV重要宿主的地位。此后，欧美等国家对本国猪群中的HEV感染情况展开了广泛调查，研究表明猪群中HEV感染较为普遍，且基因型分布存在地域差异，在欧洲部分地区基因3型较为常见，而在美洲部分地区基因3型和4型均有一定比例的感染。

国内对猪戊型肝炎病毒的研究也在不