病毒与细胞间的相互作用.pptVIP

第1页，共27页，星期日，2025年，2月5日第一节病毒的细胞培养病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。第2页，共27页，星期日，2025年，2月5日一、动物接种接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。第3页，共27页，星期日，2025年，2月5日动物接种的优缺点：优点：（1）不需要复杂的仪器设备；（2）技术简单；（3）易成功缺点：（1）个体差异大（2）价格昂贵（3）数量有限（4）需要隔离畜舍第4页，共27页，星期日，2025年，2月5日二、鸡胚接种一种比较经济简便的方法。卵壳壳膜第5页，共27页，星期日，2025年，2月5日鸡胚接种的优缺点：优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大，不需特殊设备缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。第6页，共27页，星期日，2025年，2月5日细胞培养(cellculture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。三、细胞培养第7页，共27页，星期日，2025年，2月5日每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等无个体差异，准确性和重复性好可严格执行无菌操作细胞培养本身就能显示病毒的生长特征应用空斑技术可进行病毒的克隆化优点：第8页，共27页，星期日，2025年，2月5日根据细胞来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型：原代细胞：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。二倍体细胞：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。传代细胞：能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。（一）细胞的类型第9页，共27页，星期日，2025年，2月5日（二）细胞培养的方法静置培养：实验室常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单层。旋转培养：大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞贴附于玻瓶四周，长成单层。第10页，共27页，星期日，2025年，2月5日第二节病毒与细胞的相互作用杀细胞感染非杀细胞感染引致持续感染，对细胞代谢无影响。产生干扰素第11页，共27页，星期日，2025年，2月5日由病毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜下观察。①细胞圆缩，如痘病毒和呼肠孤病毒等；②细胞聚合，如腺病毒；③细胞融合形成合胞体，如副粘病毒和疱疹病毒；④有些病毒能形成包涵体。一、病毒引致的杀细胞变化（一）细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)第12页，共27页，星期日，2025年，2月5日正常细胞CPECPE观察第13页，共27页，星期日，2025年，2月5日正常单层A72细胞接种CCV后出现细胞拉网的的单层A72细胞CPE观察第14页，共27页，星期日，2025年，2月5日CPE观察正常单层A72细胞接种犬冠状病毒（CCV）后形成合胞体的的单层A72细胞第15页，共27页，星期日，2025年，2月5日合胞体（syncytia）是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞细胞膜融合的产物，表现为若干细胞的相邻细胞膜消失，成为多核巨细胞。第16页，共27页，星期日，2025年，2月5日能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。50%组织细胞感染量（TCID50）第17页，共27页，星期日，2025年，2月5日（二）空斑试验将适当浓度的病毒悬液加入单层细胞培养中，当病毒吸附细胞后，再覆盖一层融化的琼脂。病毒在细胞内复制后产生局限性病灶，病灶逐渐扩大，肉眼也能看见，此即空斑试验。第18页，共27页，星期日，2025年，2月5日第19页，共27页，星期日，2025年，2月5日