蛋白质结构与功能的关系课件.pptVIP

（三）電泳蛋白質在溶液中解離成帶電顆粒，在電場中可以向電荷相反的電極移動，這種現象稱為蛋白質電泳(Electrophoresis)。電泳的方向與速度：電荷的種類

電荷的多少

顆粒大小電泳技術已成為分析、分離蛋白質的重要手段之一SDS電泳垂直板電泳毛細管電泳水準板電泳圓盤電泳電泳支持物濾紙凝膠薄膜幾種重要的蛋白質電泳*SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳：常用於蛋白質分子量的測定。*等電聚焦電泳：通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。*雙向凝膠電泳：是蛋白質組學研究的重要技術。二、膠體性質蛋白質為大分子，相對分子量大，在水溶液中形成直徑1～100nm，屬膠體範圍。蛋白質水溶液為一穩定的親水膠體溶液

因素：(1)顆粒週邊有水膜

(2)帶電荷布朗運動丁達爾效應(光散射現象)電泳現象不能透過半透膜

利用其不能透過半透膜性質可進行蛋白質的分離、純化等。----++++親水膠體水膜等電點狀態蛋白質帶負電狀態蛋白質帶正電狀態蛋白質脫水作用++++----OH-H+蛋白質沉澱OH-H+OH-H+三、沉澱性質如果加入適當的試劑使蛋白質分子處於等電點狀態或失去水化層（消除相同電荷，除去水膜），蛋白質膠體溶液就不再穩定並將產生沉澱。沉澱方法類別:1、高濃度中性鹽（鹽析、鹽溶）2、有機溶劑沉澱3、重金屬鹽類沉澱4、生物鹼試劑和某些酸類沉澱1.高濃度中性鹽中性鹽對碳氧血紅蛋白的溶解度球蛋白通常不溶於純水，而溶於稀中性鹽溶液，其溶解度隨稀鹽濃度的增加而增大，此現象稱為鹽溶。加入高濃度的中性鹽(如硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等)可破壞蛋白質的水化層，中和蛋白質的電荷，從而使蛋白質沉澱析出，此現象稱為鹽析。鹽溶、鹽析不同蛋白質析出時需要的鹽濃度不同，調節鹽濃度以使混合蛋白質溶液中的幾種蛋白質分段析出，這種方法稱為分段鹽析。如血清中蛋白質+半飽和硫酸銨析出球蛋白

血清中蛋白質+飽和硫酸銨析出清蛋白可用分段鹽析法分離蛋白質2、有機溶劑丙酮、乙醇等有機溶劑可破壞蛋白質分子水化層，導致其沉澱析出。

（因為有機溶劑比蛋白質有更強的親水作用，可作為脫水劑。）Hg2+、Ag+、Pb2+等重金屬離子可與蛋白質中帶負電荷的基團形成不易溶解的鹽而沉澱，因此重金屬鹽均有毒，誤食重金屬鹽時應及時服用大量生雞蛋清或牛奶。為什麼？進入胃內的蛋白質有的被消化，但大部分都以未消化的形式進入小腸。小腸液的pH值為7.0，此時蛋白質帶負電荷，很容易與帶正電荷的已進入小腸的重金屬結合形成難消化的沉澱，而被排出體外。3、重金屬鹽生物鹼試劑是指能使生物鹼沉澱的一類試劑，如：單寧酸、苦味酸、鉬酸、鎢酸、鞣酸等。生物鹼試劑以及某些酸（如三氯醋酸、水楊磺酸、硝酸等）在溶液pH小於蛋白質的等電點時，皆能沉澱蛋白質。4、生物鹼試劑沉澱原理是：一般生物鹼試劑皆為酸性物質，而蛋白質在酸性溶液中帶正電荷，其正離子基團（如一NH3+）能與帶負電荷的酸根相結合,變成為溶解度很小的蛋白鹽。臨床化驗時，常用這類試劑（如磷鎢酸或三氯醋酸）除去血液中干擾測定的蛋白質，或用苦味酸檢驗尿中的蛋白質。不可逆沉澱在強烈沉澱條件下，不僅破壞了蛋白質膠體溶液的穩定性，而且也破壞了蛋白質的結構和性質，產生的蛋白質沉澱不可能重新溶解於水。由於沉澱過程發生了蛋白質的結構和性質的變化，所以又稱為變性沉澱。如加熱沉澱、強酸堿沉澱、重金屬鹽沉澱和生物鹼沉澱等都屬於不可逆沉澱。變性的蛋白質易於沉澱，沉澱的蛋白質不一定變性。四、蛋白質的變性與複性（一）變性(最早提出變性理論的是我國科學家吳憲。)1、概念：在理化因素的影響下，天然蛋白質分子內部原有的高級結構發生變化時，其理化性質和生物學功能都隨之改變或喪失，但並未導致一級結構的變化，這種現象叫變性作用。變性後的蛋白質稱為變性蛋白。主要發生二硫鍵和非共價鍵的破壞，不涉及一級結構的改變。返回蛋白質結構與功能的關係一、一級結構與功能的關係（一）一級結構的種屬差異與分子進化（二）一級結構的變異與分子病（一）一級結構的種屬差異與分子進化1、幾個概念：（1）同源蛋白質：指在不同的有機體中表現同一功能的蛋白質。（2）不變殘基和可變殘基：同源蛋白質的AA序列中許多位置的AA對於不同種屬來說都相同稱為不變殘