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作物杂志Crops2024(2)30-39DOI:10.16035/j.issn.1001-7283.2024.02.005

玉米ZmMAPKKK21基因的克隆和生物信息学分析

张倩1,2任雯2赵冰兵2周秒依2李韩帅2刘亚2杜何为1

（1长江大学生命科学学院，434025，湖北荆州；2北京市农林科学院玉米研究所/

玉米DNA指纹及分子育种北京重点实验室，100097，北京）

摘要丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase，MAPK）在植物应对生物和非生物胁迫过程中发

挥着重要作用。在前期研究中我们挖掘到ZmMAPKKK21这一潜在的重要抗旱基因，本研究从玉米抗旱自交系J24

中克隆获得ZmMAPKKK21基因，并对其进行生物信息学分析。结果表明，玉米ZmMAPKKK21基因开放阅读框

长1419bp，编码472个氨基酸，是不具有信号肽的亲水性蛋白，且其启动子序列含有多个与逆境胁迫和激素有

关的顺式作用元件；玉米中的MAPKKK21蛋白预测定位在细胞核上，蛋白互作预测结果显示，ZmMAPKKK21

蛋白与参与植物逆境胁迫相关的MAPKK3蛋白和ZIM家族蛋白发生互作，其结构与高梁（SorghumbicolorL.）

和谷子（SetariaitalicaL.）等高抗早禾本科作物相比，不但在STKc_MAPKKK结构域上高度保守，且具有更加

相似的二级结构和三级结构；qRT-PCR分析发现，ZmMAPKKK21基因在玉米根系中表达水平较高，干旱胁迫后

该基因在根和叶中表达上调，进一步验证了ZmMAPKKK21基因的表达与干旱胁迫响应的相关性。

关键词玉米；MAPKKK；生物信息学分析；表达分析

丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated型，26个为MEKK亚型，8个为ZIK亚型[8]。研

proteinkinase，MAPK）是一种高度保守的蛋白激究表明，MAPKKK基因在植物的抗逆机制中发挥

酶，广泛存在于动物、植物和微生物等各类真核生着重要作用[9]，苦荞中鉴定出的MAPKKK家族中

物中[]。植物中的MAPK级联途径由3种激酶组FtMAPKKK8、FtMAPKKK10和FtMAPKKK24可

成，即MAPKK激酶（MAPKKK）、MAPK激酶积极响应干旱、高温和盐碱等非生物胁迫[10]。此

（MAPKK）和MAP激酶（MAPK），它是真核外，研究[I表明，苹果对苹果轮纹病菌的抗性受

生物中感受并且传导迫信号的一种重要的生理MAPKKK1和MdBSK1的互作调控。在拟南芥中

途径，在调节植物对环境的适应方面起着主导作过表达MAPKKK18可通过激活下游MAPKKK3途

用[2]。当植物感受外界刺激信号时，通过这3种激径显著增强其耐旱性[12]。通过对高梁MAPK级联

酶的依次磷酸化（MAPKKK→MAPKK→MAPK）基因进行分析[13]，发现SbMPK14基因表现出对干

进行信号传递，最终由MAPK磷酸化下游底物旱的超敏反应，故将该基因作为一个干旱胁迫的负

（包括细胞骨架蛋白、蛋白激酶和细胞凋亡因子调控因子。上述研究表明可通过获得关键抗逆

等）调控响应基因的表达，促使植物对逆境做出MAPKKK基因并结合转基因等手段导入作物的方

反应[3-4]。MAPKKK位于MAPK级联途径的最上法创制抗旱新种质。

游，分为3种亚型，分别为Raf、MEKK和ZIK[5]。玉米（ZeamaysL.）是一种非常重要的粮饲兼

植物MAPKKK是MAPK家族中成员最多的一用作物，在农业生产中占有很重要的地位。玉米在

类，拟南芥中有80个MAPKKK，其中48个属于生长发育过程中极易受到外界因素的影响，而干旱

Raf亚型，21个属于MEKK亚型，11个属于ZIK由于其分布范围广、发生频率高和持续时间长的特

亚型[6]。水稻中存在75个MAPKKK，这3种亚型点，是影响玉米产量的最主要因素之一[14]。基于

分别含有43、22和10个成员[7]。本课题组前期对已知参与胁迫反应和推定的耐受性基因，利用基

玉米中的MAPKKK家族基因进行鉴定发现玉米因工程手段创制抗逆植物是一种改良作物品种的

中共含有71个MAPKKK，其中37个为Raf亚快速途径[15]。因