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环维黄杨星D：对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护机制探究

一、引言

1.1研究背景

心血管疾病是全球范围内威胁人类健康的重要公共卫生问题。《中国心血管健康与疾病报告2022》指出，由于居民不健康生活方式流行、心血管病危险因素人群庞大以及人口老龄化加速，中国心血管病发病率和死亡率仍在升高，疾病负担下降的拐点尚未出现。目前，中国心血管病现患人数达3.3亿，每5例死亡中就有2例死于心血管病，在城乡居民疾病死亡构成比中，心血管病占首位。2020年，缺血性心脏病（冠心病、心梗等）、出血性脑卒中（脑出血）和缺血性脑卒中（脑梗死）是中国心血管病死亡的三大主要原因。

心肌细胞缺氧复氧损伤是心血管疾病发生发展过程中的关键病理环节，如心肌梗死、心力衰竭、心律失常等疾病均与心肌细胞缺氧复氧损伤密切相关。在心肌缺血时，心肌细胞因供氧不足导致能量代谢障碍、离子失衡等一系列病理变化，而当恢复血流灌注（复氧）后，非但未能使心肌细胞功能恢复，反而会引发更严重的损伤，即缺血-再灌注损伤，其中缺氧复氧损伤是其重要的组成部分。这种损伤机制复杂，涉及能量缺乏、钙超载、自由基生成增多、酸中毒以及细胞膜通透性增加等多个方面。细胞内钙离子浓度在心肌细胞生理功能中起着关键作用，正常静息状态下，心肌细胞内钙离子浓度维持在较低水平，而在缺氧复氧过程中，细胞内钙离子稳态失衡，浓度急剧升高，激活一系列钙依赖性蛋白酶和磷脂酶，导致细胞骨架破坏、线粒体功能障碍等，进一步加重心肌细胞损伤。同时，缺氧复氧过程中产生大量的自由基，如超氧阴离子、羟自由基等，这些自由基具有极强的氧化活性，可攻击细胞膜上的不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化反应，导致细胞膜结构和功能受损，细胞内酶释放，最终导致心肌细胞死亡。

环维黄杨星D（CyclovirobuxinumD，CVB-D）是从黄杨科植物中国小叶黄杨及其同属植物中提取得到的生物碱，是治疗心血管疾病的天然药物黄杨宁的主要有效成分。近年来，对CVB-D的心血管药理研究取得了诸多成果，其具有多种心血管保护作用。在正性肌力作用方面，CVB-D能够增强心肌收缩力，有助于心脏更有效地泵血，改善心脏功能；在抗心肌缺血作用上，它可以降低心肌的耗氧量，减轻心脏负担，特别是对于冠状动脉粥样硬化性心脏病患者，能够减少心绞痛发作的频率，同时改善冠状动脉的血液循环，使心肌能够得到更充足的血液供应，防止心肌缺血；在抗心律失常方面，对部分患者能起到调节心律的作用，维持心脏节律的稳定；还能改善血液流变学及血流动力学、扩张血管和改善微循环。然而，目前关于CVB-D对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用的研究还不够深入，其具体的保护机制尚未完全明确。深入研究CVB-D对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制，对于进一步揭示其心血管保护作用的分子机制，为心血管疾病的治疗提供新的理论依据和治疗策略具有重要意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究环维黄杨星D对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及相关分子机制。通过建立体外心肌细胞缺氧复氧损伤模型，从细胞形态、细胞活力、氧化应激指标、钙离子浓度、凋亡相关蛋白表达等多个层面，系统地研究环维黄杨星D对心肌细胞缺氧复氧损伤的干预效果。具体而言，本研究将运用细胞生物学、生物化学和分子生物学等技术手段，检测细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）释放、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、细胞内钙离子浓度以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化等指标，以全面评估环维黄杨星D的保护作用，并揭示其潜在的作用机制。

心肌细胞缺氧复氧损伤是心血管疾病发生发展的重要病理基础，深入研究其损伤机制及有效的干预措施，对于心血管疾病的防治具有至关重要的意义。环维黄杨星D作为一种具有多种心血管保护作用的天然生物碱，其对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究尚不完善。本研究将为进一步明确环维黄杨星D的心血管保护作用机制提供重要的实验依据，有助于开发基于环维黄杨星D的新型心血管疾病治疗药物和策略。同时，本研究也将丰富对心肌细胞缺氧复氧损伤机制的认识，为心血管疾病的基础研究和临床治疗提供新的思路和方法。

二、实验材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验动物

选用出生1-3天的SD大鼠乳鼠，体重约5-8g。SD大鼠乳鼠因其心肌细胞具有较强的增殖和分化能力，在体外培养条件下能够较好地模拟体内心肌细胞的生理特性，且对缺氧复氧损伤较为敏感，是研究心肌细胞缺氧复氧损伤的常用实验动物模型。本实验所用SD大鼠乳鼠购自[动物供应商名称]，动物生产许可证号为[许可证号]。大鼠乳鼠饲养于温度为(22±2)℃、相对湿度为(