乳腺癌骨髓微转移检测技术与肿瘤特异性CTLs细胞免疫治疗的协同探索.docxVIP

乳腺癌骨髓微转移检测技术与肿瘤特异性CTLs细胞免疫治疗的协同探索

一、引言

1.1研究背景与意义

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率在全球范围内呈逐年上升趋势。据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球最新癌症负担数据显示，2020年全球乳腺癌新发病例达226万例，首度超过肺癌，成为全球第一大癌症。在中国，乳腺癌的发病率同样位居女性癌症首位，每年新发病例超过42万，死亡病例超过12万，严重威胁广大女性的健康。

尽管目前在乳腺癌的早期筛查、诊断和治疗方面取得了一定的进展，如手术、放疗、化疗、内分泌治疗和靶向治疗等综合治疗手段的应用，使得部分患者的生存率有所提高，但乳腺癌的转移和复发仍然是治疗失败的主要原因，严重影响患者的预后和生活质量。其中，骨髓微转移作为乳腺癌远处转移的重要途径之一，在乳腺癌的发展过程中起着关键作用。骨髓微转移是指在常规检查中难以发现的，乳腺癌细胞通过血液循环等途径扩散至骨髓，并在骨髓中存活、增殖的微小转移灶。多项研究表明，乳腺癌骨髓微转移是临床远处转移灶的先兆，可作为独立因素判断预后，在指导治疗、评价疗效及术后复发、转移的监测上有重要意义。然而，由于骨髓微转移的癌细胞数量较少，且处于隐匿状态，传统的检测方法难以准确检测，导致部分存在骨髓微转移的患者未能及时得到有效的治疗，进而增加了复发和转移的风险。

肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）细胞免疫治疗作为一种新兴的肿瘤治疗方法，为乳腺癌的治疗带来了新的希望。CTLs是一种重要的免疫细胞，能够特异性识别并杀伤肿瘤细胞，在肿瘤免疫监视和免疫治疗中发挥着关键作用。通过体外诱导培养肿瘤特异性CTLs，然后回输到患者体内，可以增强患者的肿瘤免疫应答，减轻肿瘤对免疫系统的抑制，从而达到治疗肿瘤的目的。与传统的治疗方法相比，CTLs细胞免疫治疗具有特异性强、副作用小等优点，能够更好地提高患者的生存率和生活质量。

因此，深入研究乳腺癌骨髓微转移的检测方法，提高其检测的准确性和敏感性，以及探索肿瘤特异性CTLs细胞免疫治疗对乳腺癌骨髓微转移的治疗效果和作用机制，对于优化乳腺癌的治疗方案，提高患者的治疗成功率和预后具有重要的理论和实际意义。本研究旨在通过对乳腺癌患者骨髓微转移的检测及应用肿瘤特异性CTLs细胞对微转移阳性患者进行治疗，探讨微转移发生规律以及免疫细胞过继治疗对微转移的治疗作用，为乳腺癌的预后判断及制定综合治疗方案提供有力的依据。

1.2国内外研究现状

1.2.1乳腺癌骨髓微转移检测的研究现状

近年来，乳腺癌骨髓微转移的检测在国内外受到了广泛关注，众多学者致力于开发更加准确、敏感的检测方法。在检测技术方面，免疫组织化学法（IHC）是较早应用于乳腺癌骨髓微转移检测的方法之一。该方法利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过标记物对骨髓中的癌细胞进行识别和定位。例如，有研究利用IHC检测细胞角蛋白（CK）在骨髓中的表达，CK是上皮细胞的特异性标志物，乳腺癌细胞属于上皮源性细胞，因此CK的表达可提示骨髓微转移的存在。然而，IHC的敏感性相对较低，对于癌细胞数量较少的微转移灶可能难以检测到。

逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术的出现为乳腺癌骨髓微转移的检测带来了新的突破。RT-PCR能够将骨髓中的RNA逆转录为cDNA，然后通过扩增特定的肿瘤相关基因来检测微转移。以CK19基因为例，多项国内外研究均将其作为检测乳腺癌骨髓微转移的重要标志物。国内一项对102例乳腺癌患者的研究中，采用RT-PCR法以CK19为肿瘤标记物，检测骨髓微转移，结果显示骨髓CK19表达阳性者为58例，占56.9%。国外也有类似研究表明，RT-PCR检测乳腺癌骨髓微转移的阳性率在一定范围内波动，其敏感性明显高于IHC。但RT-PCR也存在一定局限性，如可能出现假阳性结果，因为在一些非癌细胞中也可能存在低水平的肿瘤相关基因表达。

流式细胞术（FCM）也是常用的检测方法之一。FCM能够对单个细胞或生物颗粒进行快速、准确的分析和分选。在乳腺癌骨髓微转移检测中，FCM可通过检测骨髓细胞表面的特异性标志物，如CK18、CK19等，结合细胞的大小、粒度等参数，识别出骨髓中的癌细胞。有研究应用FCM联合检测骨髓有核细胞中CK18、CK19的阳性细胞表达率，结果显示该方法具有较高的准确性和重复性。此外，基于核酸测序技术的检测方法也逐渐兴起，如数字PCR（dPCR）和二代测序（NGS）。dPCR能够实现对核酸分子的绝对定量，在乳腺癌骨髓微转移检测中具有更高的灵敏度和特异性；NGS则可以同时检测多个基因的变异情况，为乳腺癌骨髓微转移的检测提供更全面的信