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基于抗菌肽的大肠杆菌O157:H7比色传感快速检测技术研究

一、引言

1.1研究背景

食源性致病菌是食品安全领域中极为严峻的挑战，对公众健康和社会经济均产生着深远影响。据世界卫生组织（WHO）统计，全球每年因食源性致病菌导致的食源性疾病病例数以亿计，严重威胁着人类的生命安全与生活质量。常见的食源性致病菌如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌等，可引发发热、恶心、呕吐、腹泻、食物中毒等症状，在幼儿、老年人及免疫力低下人群中，甚至可能导致菌血症、败血症、脑膜炎等严重并发症，危及生命。

大肠杆菌O157:H7作为一种极具代表性的食源性致病菌，其危害尤为突出。它属于肠出血性大肠杆菌（EHEC）的一种，具有较强的耐酸性和耐低温能力，在自然界水中可存活数周至数月，在冰箱中也能长期生存，但不耐热，加热超过75℃1分钟即被杀死。该菌主要通过污染的食物和水传播，常见的传播载体包括牛肉、生奶、鸡肉及其制品，蔬菜、水果及制品等。一旦人体感染大肠杆菌O157:H7，其临床症状表现多样，从轻症的腹泻、腹痛、呕吐，到重症的出血性结肠炎（HC）、溶血性尿毒综合症（HUS）、血栓性血小板减少性紫癜（TTP）等，严重时可导致死亡。据报道，1996年日本爆发的大肠杆菌O157:H7食物中毒事件，波及44个都府县，中毒人数过万人，死亡11人，引起了全世界的广泛关注；2011年德国的肠出血性大肠杆菌疫情，是由一种名为“Husec41”的肠出血性大肠杆菌变种引起，该变种对很多抗生素具有抗药性，造成了严重的公共卫生危机。这些大规模的疫情不仅给患者及其家庭带来了巨大的痛苦和损失，也对社会经济造成了沉重打击，包括医疗费用的增加、食品产业的损失、国际贸易的受阻以及公众对食品安全信心的下降等。

传统的大肠杆菌O157:H7检测方法如国标法（常规法），包括增菌培养、分离、鉴定等步骤，虽然准确性较高，但操作繁琐、耗时较长，整个检测过程通常需要3-5天，难以满足快速筛查和现场检测的需求，在疫情爆发初期，无法及时采取有效的防控措施，容易导致疫情的扩散；免疫学检测方法如酶联免疫吸附测定（ELISA），虽然具有一定的灵敏度和特异性，但存在假阳性和假阴性问题，且检测成本较高，需要专业的设备和技术人员操作；分子生物学检测方法如聚合酶链式反应（PCR），虽然灵敏度高、特异性强，但对实验条件和操作人员的要求苛刻，仪器设备昂贵，检测时间也相对较长，一般需要数小时，不适用于基层和现场快速检测。

因此，开发一种快速、准确、简便、低成本的大肠杆菌O157:H7检测方法迫在眉睫。这种方法能够在短时间内对大量样品进行筛查，及时发现污染源，采取有效的防控措施，阻止疫情的进一步扩散；同时，也有助于提高食品生产企业的质量控制水平，保障食品安全，增强消费者对食品的信心。

1.2大肠杆菌O157:H7概述

大肠杆菌O157:H7隶属于肠杆菌科埃希氏菌属，是肠出血性大肠杆菌（EHEC）的典型代表菌株。其在显微镜下呈现为革兰氏染色阴性、两端钝圆的短杆菌，周身具鞭毛，能运动，无芽孢，多数菌株还拥有荚膜。该菌在33-42℃环境中均可生长，最适宜的生长温度为37℃，在此温度下繁殖速度极快，而当温度达到44-45℃时，生长状况变差，45.5℃时则停止生长。它具有较强的耐酸性，在pH值处于2.5-3.0且温度为37℃的条件下，能够耐受5小时；同时，它还具备耐低温特性，在冰箱环境中可长期存活，在自然界的水中也能存活数周至数月。然而，大肠杆菌O157:H7不耐热，加热至75℃，仅需1分钟即可将其灭活，并且对氯较为敏感，在余氯浓度为1mg/L的水中便会被杀死。

在生化特性方面，除了不发酵或迟缓发酵山梨醇这一显著区别外，大肠杆菌O157:H7的其他常见生化特征与普通大肠埃希氏菌基本相似。它虽然含有uidA基因，但其编码的β-葡萄糖醛酸酶不具备活性，无法分解4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）产生荧光，即MUG试验呈阴性，这一特性在细菌鉴别中具有重要意义。血清学鉴定主要针对O抗原和H抗原，O抗原鉴定可采用玻片凝集试验或胶乳凝集试验，而H抗原鉴定则需先进行动力试验，只有动力活泼的菌株才能进一步进行玻片和试管凝集试验。此外，大肠杆菌O157:H7还能够产生大量的Vero毒素（VT），也被称作类志贺氏毒素（SLT），这是其主要的致病因子。Vero毒素依据免疫原性等差异，可细分为VT1和VT2两种类型，均由1个A亚单位和5-6个B亚单位构成。其中，B亚单位负责与宿主肠壁细胞糖脂受体相结合，随后具有毒素活性的A亚单位进入细