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饲料中粗蛋白的测定（精）

饲料中粗蛋白的测定

一、实验目的

通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方

法。

二、适用范围

本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

三、实验原理

凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏

有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼

酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计

算出粗蛋白含量。

四、试剂

（1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。

（2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸

钠，均为化学纯，磨碎混匀。

（3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。

（4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。

（5）混合指标剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶

液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。

（6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定；

①0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3mL盐酸注入1000ml蒸馏水中。

②0.02mol/L盐酸标准溶液：1.67mL盐酸注入1000ml蒸馏水

中。

（7）蔗糖：分析纯。

（8）硫酸铵：分析纯，干燥。

（9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿

乙醇溶液10mL，0.1%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液

0.5mL，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。

五、仪器设备

（1）实验室用样品粉碎机或研钵。

（2）分样筛：孔径0.45mm（40目）。

（3）分析天平：感量0.0001g。

（4）消煮炉或电炉。

（5）滴定管：酸式，10、25mL。

（6）凯氏烧瓶：250mL。

（7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。

（8）锥形瓶：150、250mL。

（9）容量瓶：100mL。

（10）消煮管：250mL。

（11）定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质

测定仪。六、分析步骤

试样的选取和制备:选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，

粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。

（1）仲裁法

①试样的消煮

称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯

氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫

酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦

化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，

然后再继续加热，至少2h。

②氨的蒸馏

A.常量蒸馏法

将试样消煮液冷却，加入60～100ml蒸馏水，摇匀，冷却。

将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合

指示剂的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶

液，轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体体

积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～

2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流

入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

B.半微量蒸馏法

将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，

冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置

的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶

内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏

过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液

10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，

塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠溶液，小心